सेल कुल आरएनए अलगाव किट सेल से कुल आरएनए अलगाव शुद्धिकरण किट
किट विवरण:
अत्यधिक शुद्ध और उच्च गुणवत्ता वाला कुल आरएनए 11 मिनट में विभिन्न सुसंस्कृत कोशिकाओं से प्राप्त किया जा सकता है।
RNase मुक्त
कमरे के तापमान पर संचालित (15-25℃)
डीएनए-क्लीनिंग कॉलम के साथ
उच्च आरएनए उपज
तेज़: 11 मिनट में निष्कर्षण समाप्त करें
सुरक्षा: कोई भी कार्बनिक रसायन नहीं
विवरण
यह किट फोरजीन द्वारा विकसित स्पिन कॉलम और फॉर्मूला का उपयोग करती है, जो 96, 24, 12 और 6-वेल प्लेटों में संवर्धित कोशिकाओं से उच्च शुद्धता और उच्च गुणवत्ता वाले कुल आरएनए को कुशलतापूर्वक निकाल सकती है।
किट एक कुशल डीएनए-क्लीनिंग कॉलम प्रदान करता है, जो सतह पर तैरनेवाला और सेल लाइसेट को आसानी से अलग कर सकता है, जीनोमिक डीएनए को बांध और हटा सकता है।ऑपरेशन सरल और समय बचाने वाला है.
Tवह केवल आरएनए कॉलम एक अद्वितीय सूत्र के साथ आरएनए को कुशलतापूर्वक बांध सकता है।बड़ी संख्या में नमूनों को एक साथ संसाधित किया जा सकता है।
किट घटक
| किट रचना | आरई-03111 | आरई-03114 |
| 50 टी | 200 टी | |
| बफ़र cRL1* | 25 एमएल | 100 एमएल |
| बफ़र cRL2 | 15 एमएल | 60 एमएल |
| बफर RW1* | 25 एमएल | 100 एमएल |
| बफर RW2 | 24 एमएल | 96 एमएल |
| RNase-मुक्त ddH2O | 10 एमएल | 40 एमएल |
| आरएनए-केवल कॉलम | 50 | 200 |
| डीएनए-सफाई कॉलम | 50 | 200 |
| अनुदेश | 1 | 1 |
*कृपया ऑपरेशन के दौरान दस्ताने पहनें और सुरक्षात्मक उपाय करें क्योंकि बफ़र सीआरएल1 और बफ़र आरडब्ल्यू1 में परेशान करने वाले कैओट्रोपिक लवण होते हैं।
विशेषताएँ एवं लाभ
■ पूरी प्रक्रिया बर्फ स्नान और कम तापमान सेंट्रीफ्यूजेशन के बिना, कमरे के तापमान (15-25℃) पर संचालित होती है।
■ पूरी किट RNase-मुक्त है, RNA क्षरण के बारे में चिंता करने की कोई आवश्यकता नहीं है।
■ डीएनए-क्लीनिंग कॉलम विशेष रूप से डीएनए को बांधता है, ताकि किट अतिरिक्त DNase जोड़े बिना जीनोमिक डीएनए संदूषण को हटा सके।
■ उच्च आरएनए उपज: केवल आरएनए कॉलम और अद्वितीय सूत्र आरएनए को कुशलतापूर्वक शुद्ध कर सकते हैं।
■ तेज़ गति: संचालित करने में आसान और 11 मिनट में पूरा किया जा सकता है।
■ सुरक्षा: किसी कार्बनिक अभिकर्मक की आवश्यकता नहीं है।
■ उच्च गुणवत्ता: शुद्ध आरएनए उच्च शुद्धता का है, प्रोटीन और अन्य अशुद्धियों से मुक्त है, और बाद के विभिन्न प्रयोगों को पूरा कर सकता है।
किट आवेदन
यह 96, 24, 12 और 6-वेल प्लेटों में संवर्धित कोशिकाओं से कुल आरएनए के निष्कर्षण और शुद्धिकरण के लिए उपयुक्त है।
कार्य प्रवाह
आरेख
सेल टोटल आरएनए आइसोलेशन किट के एगरोज़ जेल बैटरी आरेख ने उपरोक्त विभिन्न संख्या में कोशिकाओं का इलाज किया, 20μl मात्रा क्षालन, 2μl शुद्ध कुल आरएनए 1% लें।
भंडारण और शेल्फ जीवन
किट को कमरे के तापमान (15-25 ℃) पर 12 महीने या 2-8 ℃ पर लंबे समय (24 महीने) तक संग्रहीत किया जा सकता है।
2-हाइड्रॉक्सी-1-एथेनथियोल (वैकल्पिक) जोड़ने के बाद बफर सीआरएल1 को 1 महीने के लिए 4 ℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है।
आरएनए निकाला नहीं जाता है या आरएनए की पैदावार कम होती है
अक्सर विभिन्न प्रकार के कारक होते हैं जो पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करते हैं, जैसे: ऊतक नमूना आरएनए सामग्री, संचालन की विधि, निक्षालन मात्रा, आदि।
1. ऑपरेशन के दौरान आइस बाथ या क्रायोजेनिक (4 डिग्री सेल्सियस) सेंट्रीफ्यूजेशन किया गया।
सिफ़ारिश: पूरी प्रक्रिया के दौरान कमरे के तापमान (15-25 डिग्री सेल्सियस) पर काम करें, बर्फ से स्नान न करें और कम तापमान पर सेंट्रीफ्यूज न करें।
2. अनुचित नमूना संरक्षण या अत्यधिक नमूना भंडारण समय।
सिफ़ारिश: नमूनों को -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें या तरल नाइट्रोजन में फ्रीज करें और बार-बार फ्रीज-पिघलने के उपयोग से बचें;आरएनए निष्कर्षण के लिए ताजा ऊतक या सुसंस्कृत कोशिकाओं का उपयोग करने का प्रयास करें।
3. अपर्याप्त नमूना विश्लेषण।
सिफ़ारिश: ऊतक को समरूप बनाते समय, सुनिश्चित करें कि ऊतक पर्याप्त रूप से समरूप है और ऊतक कोशिकाएं आरएनए की रिहाई को समझाने के लिए पर्याप्त रूप से विभाजित हैं।
4. एलुएंट सही ढंग से नहीं डाला गया है।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि RNase-मुक्त ddH2शुद्धिकरण स्तंभ झिल्ली के मध्य में O को बूंद-बूंद करके जोड़ा जाता है।
5. बफ़र RL2 या बफ़र RW2 में पूर्ण इथेनॉल की सही मात्रा नहीं जोड़ी गई थी।
सिफ़ारिश: निर्देशों का पालन करें, बफ़र आरएल2 और बफ़र आरडब्ल्यू2 में पूर्ण इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ें और किट का उपयोग करने से पहले अच्छी तरह मिलाएं।
6. ऊतक के नमूने की खुराक उचित नहीं है।
सिफ़ारिश: 10-20 मिलीग्राम ऊतक या (1-5) × 10 का उपयोग करें6प्रति 500 μl बफर आरएल1 कोशिकाएं, क्योंकि अत्यधिक ऊतक उपयोग के परिणामस्वरूप आरएनए निष्कर्षण कम हो सकता है।
7. अनुचित निक्षालन मात्रा या अपूर्ण निक्षालन।
सिफ़ारिश: शुद्धि स्तंभ की निक्षालन मात्रा 50-200 μl है;यदि निक्षालन प्रभाव संतोषजनक नहीं है, तो पहले से गरम RNase-मुक्त ddH जोड़ने के बाद कमरे के तापमान प्लेसमेंट समय को बढ़ाने की सिफारिश की जाती है2ओ, उदाहरण के लिए 5-10 मिनट के लिए।
8.बफ़र RW2 धोने के बाद शुद्धिकरण स्तंभ में इथेनॉल अवशेष होता है।
सिफ़ारिश: यदि बफर आरडब्ल्यू2 धोने के बाद इथेनॉल अवशेष है, तो 1 मिनट के लिए खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन करें, खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन ऑपरेशन का समय 2 मिनट तक बढ़ाया जा सकता है, या अवशिष्ट इथेनॉल को पर्याप्त रूप से हटाने के लिए शुद्धिकरण कॉलम को 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर रखा जा सकता है।
शुद्ध आरएनए का क्षरण होता है
शुद्ध आरएनए की गुणवत्ता नमूने के संरक्षण, आरएनएएस संदूषण और हेरफेर आदि जैसे कारकों से संबंधित है।
1. ऊतक के नमूने समय पर नहीं रखे जाते।
सिफ़ारिश: यदि संग्रह के बाद ऊतक के नमूनों या कोशिकाओं का समय पर उपयोग नहीं किया जाता है, तो तुरंत -80 डिग्री सेल्सियस या तरल नाइट्रोजन पर क्रायोप्रिजर्व करें।आरएनए निकालने के लिए, जब भी संभव हो नए लिए गए ऊतक या कोशिका के नमूने का उपयोग करें।
2. ऊतक के नमूनों का बार-बार जमना-पिघलना।
सिफ़ारिश: ऊतक के नमूनों को संग्रहीत करते समय, संरक्षण के लिए उन्हें छोटे टुकड़ों में काटना सबसे अच्छा है, और नमूने के बार-बार जमने-पिघलने और आरएनए के क्षरण से बचने के लिए उनका उपयोग करते समय एक टुकड़े को हटा दें।
3. ऑपरेशन के दौरान RNase पेश किया गया है या डिस्पोजेबल दस्ताने, मास्क आदि नहीं पहने हुए हैं।
सिफ़ारिश: आरएनए निष्कर्षण प्रयोगों को अलग-अलग आरएनए हेरफेर कमरों में सबसे अच्छा किया जाता है और प्रयोग से पहले तालिका को साफ़ कर दिया जाता है।
RNase की शुरूआत के कारण होने वाले RNA क्षरण को कम करने के लिए प्रयोग के दौरान डिस्पोजेबल दस्ताने और मास्क पहनें।
4. उपयोग के दौरान अभिकर्मक RNase से दूषित हो जाते हैं।
सिफ़ारिश: संबंधित प्रयोगों के लिए एक नए एनिमल टोटल आरएनए आइसोलेशन किट से बदलें।
5. आरएनए हेरफेर में उपयोग किए जाने वाले सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, टिप्स आदि आरएनएएस से दूषित होते हैं।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि आरएनए निष्कर्षण में उपयोग की जाने वाली सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, टिप्स, पिपेट आदि सभी आरएनसे-मुक्त हैं।
शुद्ध प्राप्त आरएनए डाउनस्ट्रीम प्रयोगों को प्रभावित करता है
शुद्धिकरण स्तंभ द्वारा शुद्ध किए गए आरएनए, यदि नमक आयन, प्रोटीन सामग्री बहुत बड़ी है, तो डाउनस्ट्रीम प्रयोग को प्रभावित करेगा, जैसे: रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, उत्तरी ब्लॉट एट अल।
1. निक्षालित आरएनए में नमक आयन अवशेष होते हैं।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि बफर आरडब्ल्यू2 में इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ी गई है और ऑपरेशन के लिए संकेतित केन्द्रापसारक गति पर 2 शुद्धिकरण कॉलम वॉश करें;यदि कोई नमक आयन अवशेष है, तो शुद्धिकरण कॉलम को कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए बफर आरडब्ल्यू 2 पर छोड़ दें और नमक संदूषण को अधिकतम करने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन करें।
2. निक्षालित आरएनए में इथेनॉल अवशेष।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि बफर RW2 धोने के बाद, ऑपरेशन के लिए संकेतित सेंट्रीफ्यूजेशन गति पर खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन ऑपरेशन करें, यदि अभी भी इथेनॉल अवशेष है तो खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन ऑपरेशन का समय 2 मिनट तक बढ़ाएं, या इसे 5 मीटर के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दें।
