डब्ल्यू: भाई, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पूरा हो गया है, और अंत में अंतिम चरण - फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर!अरे भाई, रियल-टाइम क्वांटिटेटिव पीसीआर क्या है?
एम: पीसीआर आप हमेशा से जानते हैं, है ना?
डब्ल्यू:आप जानते हैं, पीसीआर पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया है, और यह एक ऐसी तकनीक है जो डीएनए को बढ़ाती है!
एम: यह लगभग... यह विशिष्ट प्राइमरों के माध्यम से लक्ष्य अनुक्रम को दस लाख से अधिक गुना तक बढ़ाने की एक तकनीकी विधि है, लेकिन यह केवल लक्ष्य अनुक्रम की उपस्थिति या अनुपस्थिति को इंगित करता है, और प्रारंभिक टेम्पलेट की मात्रा निर्धारित नहीं कर सकता है।प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर इस समस्या को हल करने के लिए विकसित एक तकनीकी विधि है।वास्तविक समय पीसीआर और मात्रा पीसीआर (क्यूपीसीआर) आमतौर पर इसे संदर्भित करते हैं।
डब्ल्यू: सामान्य पीसीआर से अंतर प्रतिदीप्ति परिमाणीकरण में निहित है?
एम: हां, यानी, प्रत्येक पीसीआर चक्र के विस्तार चरण में, प्रतिदीप्ति सिग्नल तीव्रता का पता लगाया जाता है, और प्रारंभिक टेम्पलेट राशि की गणना सिग्नल तीव्रता के परिवर्तन के अनुसार की जा सकती है।
डब्ल्यू: यह बहुत जटिल लगता है!क्या मुझे इसकी गणना स्वयं करनी होगी?
एम: इसके लिए आपको धीरे-धीरे सीखने की आवश्यकता है, सिद्धांत को समझने में सक्षम होना सबसे अच्छा है।अब आप पहले सीटी मान पर ध्यान केंद्रित कर सकते हैं, जो अपेक्षाकृत सहज प्रयोगात्मक डेटा है, और इसका आकार प्रारंभिक टेम्पलेट राशि के आकार से मेल खाता है।प्रवर्धन वक्र और पिघलने वक्र जैसे ग्राफ़ भी हैं।आपका प्रयोग सफल है या नहीं, इस पर अंतिम निर्णय उनका ही होता है।
डब्ल्यू:ओह, भाई.तो फिर मैं क्यूपीसीआर प्रयोग करने जा रहा हूँ!
एम: विशेष ध्यान दें कि अभिकर्मक क्षेत्र में टेम्पलेट न जोड़ें, अन्यथा आपका अप्रयुक्त मिश्रण आसानी से दूषित हो जाएगा!
डब्ल्यू: समझ गया!
रियल टाइम पीसीआर Easyᵀᴹ-SYBR ग्रीन आई किट
उच्च दक्षता, अधिक विशिष्टता
उच्च संवेदनशीलता, अच्छी अनुकूलता
पोस्ट करने का समय: जुलाई-22-2022