सेल डायरेक्ट आरटी क्यूपीसीआर किट—एसवाईबीआर ग्रीन आई डायरेक्ट सेल लिसिस सेल रेडी वन-स्टेप क्यूआरटी-पीसीआर किट
विवरण
यह किट एक अद्वितीय लिसीज़ बफर सिस्टम का उपयोग करता है जो आरटी-क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए संवर्धित सेल नमूनों से आरएनए को जल्दी से मुक्त कर सकता है, जिससे समय लेने वाली और श्रमसाध्य आरएनए शुद्धिकरण प्रक्रिया समाप्त हो जाती है।आरएनए टेम्प्लेट को केवल 7 मिनट में प्राप्त किया जा सकता है।5×डायरेक्ट आरटी मिक्स और 2×किट द्वारा प्रदान किए गए डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर रिएजेंट वास्तविक समय के मात्रात्मक पीसीआर परिणाम जल्दी और प्रभावी रूप से प्राप्त कर सकते हैं।
5×डायरेक्ट आरटी मिक्स और 2×डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर में मजबूत अवरोधक सहिष्णुता है, और नमूनों के लाइसेट को सीधे आरटी-क्यूपीसीआर के लिए टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।इस किट में यूनीक RNA हाई-एफिनिटी फोरजीन रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, और हॉट D-Taq DNA पोलीमरेज़, dNTPs, MgCl शामिल हैं।2, प्रतिक्रिया बफर, पीसीआर अनुकूलक और स्टेबलाइजर।
विशेष विवरण
200×20μएल आरएक्सएनएस, 1000×20μएल आरएक्सएनएस
किट घटक
| भाग I | बफर सीएल |
| फोरजीन प्रोटीज प्लस II | |
| बफर एसटी | |
| भाग द्वितीय | डीएनए इरेज़र |
| 5 × डायरेक्ट आरटी मिक्स | |
| 2 × डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर | |
| 50× ROX संदर्भ डाई | |
| RNase मुक्त ddH2O | |
| निर्देश | |
सुविधाएँ और लाभ
■सरल और प्रभावी: सेल डायरेक्ट आरटी तकनीक के साथ, आरएनए नमूने केवल 7 मिनट में प्राप्त किए जा सकते हैं।
■ नमूने की मांग कम है, कम से कम 10 कोशिकाओं का परीक्षण किया जा सकता है।
■ हाई थ्रूपुट: यह 384, 96, 24, 12, 6-वेल प्लेट्स में संवर्धित कोशिकाओं में आरएनए का तेजी से पता लगा सकता है।
■ डीएनए इरेज़र जल्दी से जारी किए गए जीनोम को हटा सकता है, बाद के प्रायोगिक परिणामों पर प्रभाव को बहुत कम कर सकता है।
■ अनुकूलित आरटी और क्यूपीसीआर प्रणाली दो-चरण आरटी-पीसीआर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन को अधिक कुशल और पीसीआर को अधिक विशिष्ट, और आरटी-क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया अवरोधकों के लिए अधिक प्रतिरोधी बनाती है।
किट आवेदन
आवेदन की गुंजाइश: सुसंस्कृत कोशिकाएं।
- नमूना लिसिस द्वारा जारी आरएनए: केवल इस किट के आरटी-क्यूपीसीआर टेम्पलेट पर लागू होता है।
- किट का उपयोग निम्नलिखित उद्देश्यों के लिए किया जा सकता है: जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, siRNA-मध्यस्थता जीन साइलेंसिंग प्रभाव का सत्यापन, ड्रग स्क्रीनिंग, आदि।
आरेख
भंडारण और शेल्फ जीवन
इस किट के भाग I को 4℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए;भाग II को -20 ℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए।
Foregene Protease Plus II को 4 पर संग्रहित किया जाना चाहिए℃, -20 ℃ पर फ्रीज न करें।
अभिकर्मक 2×डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर को -20 पर संग्रहित किया जाना चाहिए℃अंधेरे में;अगर अक्सर इस्तेमाल किया जाता है, तो इसे 4 पर भी स्टोर किया जा सकता हैअल्पकालिक भंडारण के लिए ℃ (10 दिनों के भीतर उपयोग करें)।
रीयल टाइम पीसीआर प्राइमर डिजाइन सिद्धांत
फॉरवर्ड प्राइमर और रिवर्स प्राइमर
रियल टाइम पीसीआर के लिए प्राइमर डिजाइन बहुत महत्वपूर्ण है।प्राइमर पीसीआर प्रवर्धन की विशिष्टता और दक्षता से संबंधित हैं, और इन्हें निम्नलिखित सिद्धांतों के संदर्भ में डिजाइन किया जा सकता है:
प्राइमर की लंबाई: 18-30bp।
जीसी सामग्री: 40-60%।
टीएम वैल्यू: प्राइमर डिजाइन सॉफ्टवेयर, जैसे प्राइमर 5, प्राइमर का टीएम वैल्यू दे सकता है।अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमरों के टीएम मान जितना संभव हो उतना करीब होना चाहिए।Tm गणना सूत्र का भी उपयोग किया जा सकता है: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)।पीसीआर करते समय, 5 डिग्री सेल्सियस के प्राइमर टीएम मान से नीचे के तापमान को आम तौर पर एनीलिंग तापमान के रूप में चुना जाता है (एनीलिंग तापमान में इसी वृद्धि से पीसीआर प्रतिक्रिया की विशिष्टता बढ़ सकती है)।
प्राइमर और पीसीआर उत्पाद:
डिज़ाइन प्राइमर पीसीआर प्रवर्धन उत्पाद की लंबाई अधिमानतः 100-150bp है।
टेम्पलेट के द्वितीयक संरचनात्मक क्षेत्र में डिजाइन प्राइमरों को यथासंभव टाला जाना चाहिए।
अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमरों के 3' सिरों के बीच 2 या अधिक पूरक आधारों के गठन से बचें।
प्राइमर 3′ टर्मिनल बेस लगातार 3 अतिरिक्त जी या सी के साथ मौजूद नहीं हो सकता।
प्राइमर में स्वयं पूरक संरचनाएं नहीं हो सकती हैं, अन्यथा एक हेयरपिन संरचना बन जाएगी, जो पीसीआर प्रवर्धन को प्रभावित करती है।
एटीसीजी को प्राइमर अनुक्रम में यथासंभव समान रूप से वितरित किया जाना चाहिए, और 3' टर्मिनल बेस को टी के रूप में टाला जाना चाहिए।
परिशिष्ट 1: सेल डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट घटक पूरक पैक
1.सेल Lysis समाधान
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| किट घटक (24-वेल लिसिस सिस्टम / वेल) | डीआरटी-01011-ए1 | डीआरटी-01011-ए2 | |
| 100 टी | 500 टी | ||
| भागमैं | बफर सीएल | 20 मिली | 100 मिली |
| फोरजीन प्रोटीज प्लस II | 400 μl | 1 मिली × 2 | |
| बफर एसटी | 1 मिली × 2 | 10 मिली | |
| भागद्वितीय | डीएनए इरेज़र | 400 μl | 1 मिली × 2 |
2.आरटी मिक्स
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| किट घटक (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | डीआरटी-01011-बी1 |
| 200 टी | |
| 5 × डायरेक्ट आरटी मिक्स | 800 μl |
| RNase मुक्त ddH2O | 1.7 मिली × 2 |
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| किट घटक (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 टी | 1000 टी | |
| 2 × डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर | 1 मिली × 2 | 1.7 मिली × 6 |
| 50× ROX संदर्भ डाई | 40 μl | 200 μl |
| RNase मुक्त ddH2O | 1.7 मिली | 10 मिली |
निर्देश पुस्तिका:
