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आरटी-पीसीआर प्रयोगात्मक प्रतिक्रिया प्रणाली अनुकूलन विधि विस्तृत सारांश
एक, प्रतिक्रिया प्रणाली की संवेदनशीलता में वृद्धि: 1. उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए को अलग करें: सफल सीडीएनए संश्लेषण उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए से आता है।उच्च-गुणवत्ता वाला आरएनए कम से कम पूर्ण लंबाई का होना चाहिए और ईडीटीए या एसडीएस जैसे रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस इनहिबिटर से मुक्त होना चाहिए।आरएनए की गुणवत्ता अधिकतम एक निर्धारित करती है ...और पढ़ें -
पूरा पीसीआर प्राइमर डिजाइन और पीसीआर विवरण
प्राइमर डिजाइन आधार (99% समस्याओं को हल किया जा सकता है) 1. प्राइमर की लंबाई: पाठ्यपुस्तक को 15-30bp की आवश्यकता होती है, आमतौर पर लगभग 20bp।विशिष्टता सुनिश्चित करने के लिए वास्तविक स्थिति 18-24 बीपी होना बेहतर है, लेकिन जितना लंबा उतना अच्छा, बहुत लंबा प्राइमर भी विशिष्टता को कम करेगा, और उपज को कम करेगा।2. मूल...और पढ़ें -
क्यूआरटी-पीसीआर के लिए सावधानियां वरिष्ठ चिकित्सक द्वारा श्रमसाध्य रूप से संकलित की गई हैं
हर कोई qRT-PCR प्रयोग के सिद्धांत, प्राइमर डिज़ाइन, परिणाम व्याख्या आदि के बारे में बात कर रहा है, लेकिन मुझे लगता है कि मुझे आपके साथ qRT-PCR के प्रायोगिक संचालन को साझा करना चाहिए।यह छोटा है, लेकिन यह परिणाम के बारे में है।क्यूआरटी-पीसीआर करने से पहले, हमें अपने...और पढ़ें -
RT-qPCR के लिए सावधानियां
RT-qPCR प्रयोग में RNA निष्कर्षण और गुणवत्ता मूल्यांकन, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और qPCR तीन चरण शामिल हैं, प्रत्येक चरण में बहुत सारी सावधानियां हैं, हम नीचे विस्तार से परिचय देंगे।Ⅰ।आरएनए गुणवत्ता मूल्यांकन आरटी-क्यूपीसीआर प्रयोग में, आरएनए निष्कर्षण के पूरा होने के बाद, ...और पढ़ें -
वास्तविक समय पीसीआर का गहन परिचय
1. प्रारंभिक समझ इस स्तर पर, हमें कुछ अवधारणाओं और शब्दावली को समझने की आवश्यकता है, ताकि हमारे वरिष्ठों के सामने गलतियाँ करने से बचा जा सके, जैसे: प्रश्न: RT-PCR, qPCR, रीयल-टाइम PCR में क्या अंतर है, और वास्तविक समय आरटी-पीसीआर?उत्तर: आरटी-पीसीआर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर (रिवर्स टी...और पढ़ें -
पीसीआर, मल्टीपल पीसीआर, इन सीटू पीसीआर, रिवर्स पीसीआर, आरटी-पीसीआर, क्यूपीसीआर (1) - पीसीआर
पीसीआर, मल्टीपल पीसीआर, इन सीटू पीसीआर, रिवर्स पीसीआर, आरटी-पीसीआर, क्यूपीसीआर (1) - पीसीआर हम विभिन्न पीसीआर Ⅰ की अवधारणाओं, चरणों और विवरणों को सुलझाएंगे।पीसीआर पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन, जिसे पीसीआर कहा जाता है, एक आणविक जैविक तकनीक है जिसका उपयोग विशिष्ट डीएनए अंशों को बड़ा करने के लिए किया जाता है।इसे एक माना जा सकता है ...और पढ़ें -
क्यूआरटी-पीसीआर प्रायोगिक सिद्धांत
RT-qPCR को साधारण पीसीआर तकनीक से विकसित किया गया है।यह पारंपरिक पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली में फ्लोरोसेंट रसायन (फ्लोरोसेंट डाई या फ्लोरोसेंट जांच) जोड़ता है, और पीसीआर एनीलिंग और विस्तार प्रक्रिया का उनके विभिन्न ल्यूमिनसेंट तंत्र के अनुसार वास्तविक समय में पता लगाता है।फ्लोरोसेंट साइन...और पढ़ें -
आरटी-पीसीआर प्रयोगात्मक प्रतिक्रिया प्रणाली अनुकूलन विधि विस्तृत सारांश
Ⅰ।प्रतिक्रिया प्रणाली की संवेदनशीलता बढ़ाएँ: 1. उच्च-गुणवत्ता वाले आरएनए को अलग करें: सफल सीडीएनए संश्लेषण उच्च-गुणवत्ता वाले आरएनए से आता है।उच्च-गुणवत्ता वाले आरएनए को कम से कम कुल लंबे समय तक सुनिश्चित करना चाहिए और इसमें अवरोधक नहीं होते हैं जिनमें ईडीटीए या एसडीएस जैसे रिकॉर्डिंग एंजाइम नहीं होते हैं।योग्यता...और पढ़ें -
कैसे सुनिश्चित करें कि क्यूपीसीआर प्रयोगों के लिए सीटी वैल्यू की उचित रेंज
सीटी वैल्यू फ्लोरोसेंट क्वांटिटेटिव पीसीआर का सबसे महत्वपूर्ण परिणाम प्रस्तुति रूप है।इसका उपयोग जीन अभिव्यक्ति अंतर या जीन कॉपी संख्या की गणना करने के लिए किया जाता है।तो प्रतिदीप्ति परिमाणीकरण का सीटी मान क्या उचित माना जाता है?सीटी वैल्यू की प्रभावी रेंज कैसे सुनिश्चित करें?सीटी क्या है?...और पढ़ें -
अपने RT-qPCR प्रयोग की सफलता दर को दोगुना करने के लिए निम्नलिखित विवरणों पर ध्यान दें!
RT-qPCR आणविक जीव विज्ञान का मूल प्रयोग है, और सभी को इससे परिचित होना चाहिए।इसमें मुख्य रूप से तीन चरण शामिल हैं: आरएनए निष्कर्षण, सीडीएनए में रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, और रीयल-टाइम फ्लोरोसेंट क्वांटिटेटिव पीसीआर।यह मदद नहीं करता, क्या चल रहा है?मुमकिन है कि कोई समस्या हो...और पढ़ें -
आरएनए निष्कर्षण, 260/230 विशेष रूप से कम है, और पीसीआर रन का सीटी मूल्य बहुत अधिक है।इसे कैसे हल करें?
A260/A230 का निम्न अनुपात आमतौर पर 230nm पर अधिकतम अवशोषण तरंग दैर्ध्य वाली अशुद्धियों के कारण होता है।आइए देखें कि इन अशुद्धियों में क्या शामिल है: सामान्य प्रदूषक अवशोषण तरंग दैर्ध्य अनुपात प्रभाव प्रोटीन ~230nm और 280nm A 260 /A 280 और A 260 /A की एक साथ कमी ...और पढ़ें -
फ्लोरोसेंट क्वांटिटेटिव पीसीआर (क्यूपीसीआर) - प्राइमर डिजाइन
क्यूपीसीआर प्रयोगों में, प्राइमर डिजाइन भी एक बहुत ही महत्वपूर्ण कड़ी है।प्राइमर उपयुक्त हैं या नहीं, यह निकटता से संबंधित है कि क्या प्रवर्धन दक्षता मानक तक पहुँचती है, क्या प्रवर्धित उत्पाद विशिष्ट हैं, और क्या प्रायोगिक परिणाम उपलब्ध हैं।तो कैसे बनाएं...और पढ़ें