प्रकोप के प्रारंभिक चरण में, तेजी से विकास के कारण, संदिग्ध रोगियों का त्वरित निदान ही कोविड-19 को रोकने की कुंजी है।कुछ स्वीकृत न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन अभिकर्मकों के विकास का समय कम होता है, और जल्दबाजी में प्रदर्शन की पुष्टि, अपर्याप्त अभिकर्मक अनुकूलन और बैचों के बीच बड़े अंतर जैसी समस्याएं होती हैं;न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने की प्रक्रिया के विभिन्न पहलुओं में विभिन्न नैदानिक ​​​​प्रयोगशालाओं की समस्याएं भी न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के परिणामों की सटीकता को प्रभावित कर सकती हैं।यह लेख वर्तमान SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने में प्रमुख लिंक और बिंदुओं पर ध्यान केंद्रित करेगा, और प्रयोगशाला न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने और नैदानिक ​​असंगतता की झूठी नकारात्मक और सकारात्मक पुन: परीक्षा की समस्याओं का विश्लेषण करेगा।

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के सिद्धांत

SARS-CoV-2 लगभग 29 kb के जीनोम अनुक्रम वाला एक RNA वायरस है, जिसमें 10 जीन होते हैं, जो प्रभावी रूप से 10 प्रोटीन को एनकोड कर सकते हैं।वायरस आरएनए और प्रोटीन से बने होते हैं, और सबसे बाहरी परत लिपिड और ग्लाइकोप्रोटीन से बनी बाहरी परत होती है।अंदर, प्रोटीन कैप्सिड आरएनए को अपने में लपेट लेता है, जिससे आसानी से नष्ट होने वाले आरएनए (पी1) की रक्षा होती है।

SARS-COV-2 की P1 संरचना

वायरस संक्रमण पैदा करने के लिए विशिष्ट कोशिका सतह रिसेप्टर्स के माध्यम से कोशिकाओं पर आक्रमण करते हैं, और दोहराने के लिए मेजबान कोशिकाओं का उपयोग करते हैं।

वायरल न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने का सिद्धांत सेल लाइसेट के माध्यम से वायरल आरएनए को उजागर करना है, और फिर पता लगाने के लिए वास्तविक समय फ्लोरोसेंट रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (आरटी-पीसीआर) का उपयोग करना है।

पता लगाने के सिद्धांत की कुंजी न्यूक्लिक एसिड अनुक्रमों के "लक्षित मिलान" को प्राप्त करने के लिए प्राइमर और जांच का उपयोग करना है, अर्थात, SARS-CoV-2 के न्यूक्लिक एसिड अनुक्रम को ढूंढना जो लगभग 30,000 आधारों (अन्य वायरस के लिए न्यूक्लिक एसिड की समानता) "कम" क्षेत्र) में अन्य वायरस से अलग है, प्राइमर और जांच डिजाइन करें।

प्राइमर और जांच SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड के विशिष्ट क्षेत्र से अत्यधिक मेल खाते हैं, यानी विशिष्टता बहुत मजबूत है।एक बार जब परीक्षण किए जाने वाले नमूने का वास्तविक समय फ्लोरोसेंट आरटी-पीसीआर प्रवर्धन परिणाम सकारात्मक होता है, तो यह साबित होता है कि नमूने में SARS-CoV-2 मौजूद है।पी2 देखें.

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड निर्धारण के P2 चरण (वास्तविक समय फ्लोरोसेंट आरटी-पीसीआर)

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के लिए प्रयोगशाला की शर्तें और आवश्यकताएँ

न्यूक्लिक एसिड परीक्षण प्रयोगशालाएँ नकारात्मक दबाव वाले वातावरण के लिए सबसे आदर्श हैं, और उन्हें दबाव की निगरानी, ​​हवा के प्रवाह को बनाए रखने और एरोसोल को खत्म करने पर ध्यान देना चाहिए।न्यूक्लिक एसिड परीक्षण कर्मियों के पास संबंधित योग्यताएं होनी चाहिए, प्रासंगिक पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया प्रशिक्षण प्राप्त करना चाहिए और मूल्यांकन पास करना चाहिए।प्रयोगशाला को सख्ती से प्रबंधित किया जाना चाहिए, जगह-जगह ज़ोन किया जाना चाहिए, और अप्रासंगिक कर्मियों को प्रवेश करने से सख्ती से प्रतिबंधित किया जाना चाहिए।स्वच्छ क्षेत्र को हवादार और कीटाणुरहित किया जाना चाहिए।प्रासंगिक वस्तुओं को ज़ोन में रखा जाता है, साफ़ और गंदे को अलग किया जाता है, समय पर बदला जाता है, और जगह को कीटाणुरहित किया जाता है।नियमित कीटाणुशोधन: क्लोरीन युक्त कीटाणुनाशक बड़े क्षेत्रों के लिए मुख्य समाधान है, और 75% अल्कोहल का उपयोग छोटे क्षेत्रों के लिए किया जा सकता है।एरोसोल से निपटने का एक अच्छा तरीका वेंटिलेशन के लिए खिड़कियां खोलना है, और हवा कीटाणुशोधन पराबैंगनी किरणों, निस्पंदन और वायु कीटाणुशोधन के माध्यम से भी किया जा सकता है।

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड निर्धारण के मुख्य लिंक और पैरामीटर (वास्तविक समय फ्लोरोसेंट आरटी-पीसीआर)

हालाँकि प्रयोगशालाएँ आम तौर पर न्यूक्लिक एसिड "पहचान" पर पूरा ध्यान देती हैं, वास्तव में, न्यूक्लिक एसिड "निष्कर्षण" भी सफल पता लगाने के लिए महत्वपूर्ण चरणों में से एक है, जो वायरस के नमूनों के संग्रह और भंडारण से निकटता से संबंधित है।

वर्तमान में, सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले श्वसन नमूने, जैसे कि नासॉफिरिन्जियल स्वैब, दूसरी विधि का उपयोग करते हैं, जो न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और लिसीस समाधान के आधार पर तैयार किया गया एक निष्क्रियता (संरक्षण) समाधान है।एक ओर, यह वायरस संरक्षण समाधान वायरस के प्रोटीन को विकृत कर सकता है, अपनी गतिविधि खो सकता है और अब संक्रामक नहीं रह सकता है, और परिवहन और पता लगाने के चरण की सुरक्षा में सुधार कर सकता है;दूसरी ओर, यह न्यूक्लिक एसिड को मुक्त करने, न्यूक्लिक एसिड को विघटित करने वाले एंजाइम को खत्म करने और वायरस को रोकने के लिए सीधे वायरस को क्रैक कर सकता है।आरएनए ख़राब हो गया है।

न्यूक्लिक एसिड एक्सट्रैक्शन लाइसिस सॉल्यूशन के आधार पर तैयार किया गया एक वायरस सैंपलिंग सॉल्यूशन।मुख्य घटक संतुलित लवण, एथिलीनडायमिनेटेट्राएसिटिक एसिड चेलेटिंग एजेंट, गुआनिडीन नमक (गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट, गुआनिडीन हाइड्रोक्लोराइड, आदि), एनियोनिक सर्फेक्टेंट (डोडेकेन) सोडियम सल्फेट), धनायनित सर्फेक्टेंट (टेट्राडेसिल ट्राइमिथाइल अमोनियम ऑक्सालेट), फिनोल, 8-हाइड्रॉक्सीक्विनोलिन, डाइथियोथेरिटोल, प्रोटीनेज के और अन्य कई हैं। अधिक घटक.वर्तमान में, कई प्रकार के न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण किट हैं, और विभिन्न न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है।भले ही एक ही न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण अभिकर्मक का उपयोग किया जाता है, प्रत्येक किट की निष्कर्षण प्रक्रियाएं अलग-अलग होती हैं।

वर्तमान में, राष्ट्रीय चिकित्सा उत्पाद प्रशासन द्वारा अनुमोदित न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन किट उत्पादों का चयन SARS-CoV-2 जीनोम में ORF1ab, E और N जीन के आधार पर किया जाता है।विभिन्न उत्पादों का पता लगाने के सिद्धांत मूल रूप से समान हैं, लेकिन उनके प्राइमर और जांच डिज़ाइन अलग-अलग हैं।एकल-लक्ष्य खंड (ORF1ab), दोहरे-लक्ष्य खंड (ORF1ab, N या E), और तीन-लक्ष्य खंड (ORF1ab, N और E) हैं।पता लगाने और व्याख्या, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और वास्तविक समय फ्लोरोसेंट आरटी-पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली के बीच अंतर को संबंधित किट निर्देशों को संदर्भित करना चाहिए, और यह अनुशंसा की जाती है कि उपयोगकर्ता व्याख्या के लिए किट निर्देशों में निर्दिष्ट व्याख्या विधि का सख्ती से पालन करें।वास्तविक समय फ्लोरोसेंट आरटी-पीसीआर द्वारा प्रवर्धित सामान्य क्षेत्र, प्राइमर और जांच अनुक्रम पी3 में दिखाए गए हैं।

P3 जीनोम पर SARS-CoV-2 एम्प्लिकॉन लक्ष्य का स्थान और प्राइमर और जांच का क्रम

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड निर्धारण के परिणामों की व्याख्या (Rमछली-Time फ्लोरोसेंट आरटी-पीसीआर)

"SARS-CoV-2 संक्रमण के लिए निमोनिया रोकथाम और नियंत्रण योजना (दूसरा संस्करण)" ने पहली बार एकल जीन प्रवर्धन के परिणामों को आंकने के मानदंडों को स्पष्ट किया:

1. कोई Ct या Ct≥40 नकारात्मक नहीं है;

2. सीटी<37 सकारात्मक है;

3. 37-40 का सीटी मान ग्रे-स्केल क्षेत्र है।प्रयोग को दोहराने की अनुशंसा की जाती है।यदि सीटी<40 को फिर से करने का परिणाम और प्रवर्धन वक्र में स्पष्ट शिखर हैं, तो नमूना को सकारात्मक माना जाता है, अन्यथा यह नकारात्मक है।

गाइड के तीसरे संस्करण और गाइड के चौथे संस्करण ने उपरोक्त मानदंडों को जारी रखा।हालाँकि, वाणिज्यिक किटों में उपयोग किए जाने वाले विभिन्न लक्ष्यों के कारण, गाइड के उपरोक्त तीसरे संस्करण में लक्ष्यों के संयोजन को निर्धारित करने के लिए मानदंड नहीं दिए गए हैं, इस बात पर जोर दिया गया है कि निर्माता द्वारा प्रदान किए गए निर्देश मान्य होंगे।दिशानिर्देशों के पांचवें संस्करण से शुरू करते हुए, दो लक्ष्यों को स्पष्ट किया गया है, विशेष रूप से एकल लक्ष्य के लिए निर्णय मानदंड जिन्हें आंकना मुश्किल है।अर्थात्, यदि प्रयोगशाला यह पुष्टि करना चाहती है कि कोई मामला SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के लिए सकारात्मक है, तो निम्नलिखित 2 शर्तों में से 1 को पूरा करना होगा:

(1) एक ही नमूने में SARS-CoV-2 (ORF1ab, N) के दो लक्ष्यों का वास्तविक समय फ्लोरोसेंट आरटी-पीसीआर द्वारा सकारात्मक परीक्षण किया गया है।यदि एक भी लक्ष्य सकारात्मक है, तो पुन: नमूनाकरण और पुन: परीक्षण की आवश्यकता होती है।यदि परीक्षण के परिणाम एकल लक्ष्य अभी भी सकारात्मक हैं, तो इसे सकारात्मक माना जाता है।

(2) वास्तविक समय फ्लोरोसेंट आरटी-पीसीआर के दो नमूनों ने एक ही समय में एक ही लक्ष्य को सकारात्मक दिखाया या एक ही प्रकार के दो नमूनों ने एक ही लक्ष्य को सकारात्मक परीक्षण परिणाम दिखाया, जिसे सकारात्मक माना जा सकता है।हालाँकि, दिशानिर्देश इस बात पर भी जोर देते हैं कि न्यूक्लिक एसिड परीक्षण के नकारात्मक परिणाम SARS-CoV-2 संक्रमण को बाहर नहीं कर सकते हैं।गलत नकारात्मक परिणाम देने वाले कारकों को बाहर करने की आवश्यकता है, जिनमें खराब नमूना गुणवत्ता (ऑरोफरीनक्स और अन्य भागों से श्वसन नमूने), बहुत जल्दी या बहुत देर से नमूना संग्रह, नमूने संग्रहीत, परिवहन और सही ढंग से संसाधित नहीं किए गए थे, और तकनीक में ही समस्याएं थीं (वायरस भिन्नता, पीसीआर अवरोध), आदि।

SARS-CoV-2 का पता लगाने में झूठी नकारात्मकता के कारण

न्यूक्लिक एसिड परीक्षण में "गलत नकारात्मक" की अवधारणा जो वर्तमान में चिंतित है, अक्सर "गलत नकारात्मक" को संदर्भित करती है जिसमें न्यूक्लिक एसिड परीक्षण के परिणाम नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों के साथ असंगत होते हैं, यानी, नैदानिक ​​​​लक्षण और इमेजिंग परिणाम सीओवीआईडी ​​​​-19 के अत्यधिक संदिग्ध होते हैं, लेकिन न्यूक्लिक एसिड परीक्षण हमेशा कई बार "नकारात्मक" होते हैं।राष्ट्रीय स्वास्थ्य आयोग के क्लिनिकल प्रयोगशाला केंद्र ने "गलत नकारात्मक" SARS-CoV-2 परीक्षण की व्याख्या की।

(1) संक्रमित व्यक्ति की कोशिकाओं में एक निश्चित मात्रा में वायरस होता है।मौजूदा आंकड़ों से पता चलता है कि शरीर वायरस से संक्रमित होने के बाद, वायरस नाक और मुंह के माध्यम से गले में प्रवेश करता है, फिर श्वासनली और ब्रांकाई में, और फिर एल्वियोली तक पहुंचता है।संक्रमित व्यक्ति को ऊष्मायन अवधि, हल्के लक्षण और फिर गंभीर लक्षणों की प्रक्रिया और रोग के विभिन्न चरणों का अनुभव होगा।और शरीर के अलग-अलग हिस्सों में मौजूद वायरस की मात्रा अलग-अलग होती है।

कोशिका प्रकारों के वायरल लोड के संदर्भ में, वायुकोशीय उपकला कोशिकाएं (निचला श्वसन पथ)> वायुमार्ग उपकला कोशिकाएं (ऊपरी श्वसन पथ)> फ़ाइब्रोब्लास्ट, एंडोथेलियल कोशिकाएं और मैक्रोफेज, आदि;नमूना प्रकार से, वायुकोशीय लैवेज द्रव (सबसे उत्कृष्ट) > गहरी खांसी वाला बलगम > नासॉफिरिन्जियल स्वैब > ऑरोफरीन्जियल स्वैब > रक्त।इसके अलावा, मल में भी वायरस का पता लगाया जा सकता है।हालांकि, ऑपरेशन की सुविधा और रोगियों की स्वीकृति को ध्यान में रखते हुए, आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला नैदानिक ​​​​नमूना क्रम ऑरोफरीन्जियल स्वैब>नासॉफिरिन्जियल स्वैब>ब्रोन्कियल लैवेज द्रव (जटिल ऑपरेशन) और गहरा थूक (आमतौर पर सूखी खांसी, प्राप्त करना मुश्किल) है।

इसलिए, कुछ रोगियों के ऑरोफरीनक्स या नासोफरीनक्स की कोशिकाओं में वायरस की मात्रा कम या बहुत कम होती है।यदि परीक्षण के लिए केवल ऑरोफरीनक्स या नासोफरीनक्स के नमूने लिए जाते हैं, तो वायरल न्यूक्लिक एसिड का पता नहीं लगाया जाएगा।

(2) नमूना संग्रह के दौरान कोई वायरस युक्त कोशिकाएं एकत्र नहीं की गईं, या वायरल न्यूक्लिक एसिड प्रभावी ढंग से संरक्षित नहीं किया गया था।

[① अनुचित संग्रह स्थल, उदाहरण के लिए, ऑरोफरीन्जियल स्वैब एकत्र करते समय, संग्रह की गहराई पर्याप्त नहीं होती है, एकत्र किए गए नासॉफिरिन्जियल स्वैब को नाक गुहा में गहराई से एकत्र नहीं किया जाता है, आदि। एकत्र की गई अधिकांश कोशिकाएं वायरस-मुक्त कोशिकाएं हो सकती हैं;

②नमूना स्वैब का गलत तरीके से उपयोग किया जाता है।उदाहरण के लिए, स्वैब हेड की सामग्री के लिए पीई फाइबर, पॉलिएस्टर फाइबर और पॉलीप्रोपाइलीन फाइबर जैसे सिंथेटिक फाइबर की सिफारिश की जाती है।कपास जैसे प्राकृतिक रेशों का उपयोग वास्तविक संचालन में किया जाता है (प्रोटीन का मजबूत अवशोषण और धोना आसान नहीं) और नायलॉन फाइबर (खराब जल अवशोषण, जिसके कारण अपर्याप्त नमूना मात्रा होती है);

③वायरस भंडारण ट्यूबों का गलत उपयोग, जैसे पॉलीप्रोपाइलीन या पॉलीथीन प्लास्टिक भंडारण ट्यूबों का दुरुपयोग जो न्यूक्लिक एसिड (डीएनए/आरएनए) को अवशोषित करना आसान है, जिसके परिणामस्वरूप भंडारण समाधान में न्यूक्लिक एसिड की एकाग्रता में कमी आती है।व्यवहार में, वायरल न्यूक्लिक एसिड को स्टोर करने के लिए पॉलीइथाइलीन-प्रोपलीन पॉलिमर प्लास्टिक और कुछ विशेष रूप से उपचारित पॉलीप्रोपाइलीन प्लास्टिक कंटेनरों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।]

[① अनुचित संग्रह स्थल, उदाहरण के लिए, ऑरोफरीन्जियल स्वैब एकत्र करते समय, संग्रह की गहराई पर्याप्त नहीं होती है, एकत्र किए गए नासॉफिरिन्जियल स्वैब को नाक गुहा में गहराई से एकत्र नहीं किया जाता है, आदि। एकत्र की गई अधिकांश कोशिकाएं वायरस-मुक्त कोशिकाएं हो सकती हैं;

②नमूना स्वैब का गलत तरीके से उपयोग किया जाता है।उदाहरण के लिए, स्वैब हेड की सामग्री के लिए पीई फाइबर, पॉलिएस्टर फाइबर और पॉलीप्रोपाइलीन फाइबर जैसे सिंथेटिक फाइबर की सिफारिश की जाती है।कपास जैसे प्राकृतिक रेशों का उपयोग वास्तविक संचालन में किया जाता है (प्रोटीन का मजबूत अवशोषण और धोना आसान नहीं) और नायलॉन फाइबर (खराब जल अवशोषण, जिसके कारण अपर्याप्त नमूना मात्रा होती है);

③वायरस भंडारण ट्यूबों का गलत उपयोग, जैसे पॉलीप्रोपाइलीन या पॉलीथीन प्लास्टिक भंडारण ट्यूबों का दुरुपयोग जो न्यूक्लिक एसिड (डीएनए/आरएनए) को अवशोषित करना आसान है, जिसके परिणामस्वरूप भंडारण समाधान में न्यूक्लिक एसिड की एकाग्रता में कमी आती है।व्यवहार में, वायरल न्यूक्लिक एसिड को स्टोर करने के लिए पॉलीइथाइलीन-प्रोपलीन पॉलिमर प्लास्टिक और कुछ विशेष रूप से उपचारित पॉलीप्रोपाइलीन प्लास्टिक कंटेनरों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।]

(4) नैदानिक ​​प्रयोगशाला संचालन मानकीकृत नहीं है।नमूना परिवहन और भंडारण की स्थिति, नैदानिक ​​​​प्रयोगशालाओं का मानकीकृत संचालन, परिणाम व्याख्या और गुणवत्ता नियंत्रण परीक्षण परिणामों की सटीकता और विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के प्रमुख कारक हैं।16-24 मार्च, 2020 को राष्ट्रीय स्वास्थ्य आयोग के क्लिनिकल प्रयोगशाला केंद्र द्वारा किए गए बाहरी गुणवत्ता मूल्यांकन के परिणामों के अनुसार, वैध परिणाम प्राप्त करने वाली 844 प्रयोगशालाओं में से 701 (83.1%) योग्य थीं, और 143 (16.9%) नहीं थीं।योग्य, समग्र प्रयोगशाला परीक्षण की स्थिति अच्छी है, लेकिन विभिन्न प्रयोगशालाओं में अभी भी कार्मिक संचालन क्षमता, एकल-लक्ष्य सकारात्मक नमूना व्याख्या क्षमता और गुणवत्ता नियंत्रण में अंतर है।

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन की झूठी नकारात्मकता को कैसे कम करें?

न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने में झूठी नकारात्मकता को कम करने को झूठी नकारात्मकता उत्पन्न करने के चार पहलुओं से अनुकूलित किया जाना चाहिए।

(1)संक्रमित व्यक्ति की कोशिकाओं में एक निश्चित मात्रा में वायरस होता है।संदिग्ध संक्रमित व्यक्तियों के शरीर के विभिन्न हिस्सों में वायरस की सांद्रता अलग-अलग समय पर अलग-अलग होगी।यदि ग्रसनी नहीं है, तो यह ब्रोन्कियल लैवेज द्रव या मल में हो सकता है।यदि परीक्षण के लिए एक ही समय में या रोग की प्रगति के विभिन्न चरणों में कई प्रकार के नमूने एकत्र किए जा सकते हैं, तो गलत नकारात्मक से बचने में मदद मिलेगी।

(2) नमूना संग्रह के दौरान वायरस युक्त कोशिकाओं को एकत्र किया जाना चाहिए।नमूना संग्रहकर्ताओं के प्रशिक्षण को मजबूत करके इस समस्या को काफी हद तक हल किया जा सकता है।

(3) विश्वसनीय आईवीडी अभिकर्मक।राष्ट्रीय स्तर पर अभिकर्मकों के पता लगाने के प्रदर्शन मूल्यांकन पर शोध करके और मौजूदा समस्याओं पर चर्चा करके, अभिकर्मकों की पता लगाने की दक्षता में और सुधार किया जा सकता है और विश्लेषण की संवेदनशीलता में सुधार किया जा सकता है।

(4) नैदानिक ​​​​प्रयोगशालाओं का मानकीकृत संचालन।प्रयोगशाला कर्मियों के प्रशिक्षण को मजबूत करने, प्रयोगशाला गुणवत्ता प्रबंधन प्रणाली में लगातार सुधार करने, उचित विभाजन सुनिश्चित करने और कर्मियों की पहचान करने की क्षमता में सुधार करके, अनुचित प्रयोगशाला संचालन के कारण होने वाली झूठी नकारात्मकता को कम करना संभव है।

ठीक हो चुके और डिस्चार्ज किए गए मरीजों में SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड टेस्ट का दोबारा टेस्ट पॉजिटिव आने के कारण

"कोविड-19 निदान और उपचार योजना (परीक्षण सातवां संस्करण)" स्पष्ट रूप से निर्धारित करता है कि सीओवीआईडी-19 रोगियों को ठीक करने और अस्पताल से छुट्टी देने के मानदंडों में से एक यह है कि लगातार दो श्वसन पथ के नमूनों में नकारात्मक न्यूक्लिक एसिड परीक्षण (कम से कम 24 घंटे अलग) हो, लेकिन बहुत कम हैं। विभिन्न कारणों से छुट्टी दे चुके मरीजों में SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड परीक्षण फिर से सकारात्मक था।

(1)SARS-CoV-2 एक नया वायरस है।इसके रोगजनक तंत्र, रोग के कारण की पूरी तस्वीर और रोग के पाठ्यक्रम की विशेषताओं को और अधिक समझना आवश्यक है।इसलिए, एक ओर, डिस्चार्ज किए गए रोगियों के प्रबंधन को मजबूत करना और 14-दिवसीय चिकित्सा अवलोकन करना आवश्यक है।रोग की घटना, विकास और परिणाम की पूरी प्रक्रिया की समझ को गहरा करने के लिए अनुवर्ती कार्रवाई, स्वास्थ्य निगरानी और स्वास्थ्य मार्गदर्शन करें।

(2)रोगी दोबारा वायरस से संक्रमित हो सकता है।शिक्षाविद् झोंग नानशान ने कहा: क्योंकि ठीक हो चुके मरीजों में एंटीबॉडीज होती हैं, SARS-CoV-2 के दोबारा आक्रमण करने पर उन्हें एंटीबॉडीज द्वारा खत्म किया जा सकता है।ऐसे कई कारण हैं, जो मरीज के ठीक होने का कारण हो सकते हैं, या यह वायरस के उत्परिवर्तन से संबंधित हो सकते हैं, या प्रयोगशाला परीक्षण का कारण भी हो सकते हैं।यदि यह वायरस ही है, तो SARS-CoV-2 उत्परिवर्तन के कारण ठीक हुए मरीज़ द्वारा उत्पादित एंटीबॉडी उत्परिवर्तित वायरस के विरुद्ध अप्रभावी हो सकता है।यदि रोगी दोबारा उत्परिवर्तित वायरस से संक्रमित होता है, तो न्यूक्लिक एसिड परीक्षण फिर से सकारात्मक हो सकता है।

(3) जहां तक ​​प्रयोगशाला परीक्षण विधियों का सवाल है, प्रत्येक परीक्षण विधि की अपनी सीमाएं हैं।SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड का पता लगाना जीन अनुक्रम की पसंद, अभिकर्मकों की संरचना, विधि की संवेदनशीलता और अन्य कारणों से होता है, जिसके कारण मौजूदा किटों की अपनी कम पहचान सीमा होती है।मरीज का इलाज होने के बाद शरीर में वायरस कम हो जाता है।जब परीक्षण किए जाने वाले नमूने में वायरल लोड पता लगाने की निचली सीमा से नीचे है, तो एक "नकारात्मक" परिणाम दिखाई देगा।हालांकि, इस नतीजे का मतलब यह नहीं है कि शरीर में वायरस पूरी तरह से खत्म हो गया है।उपचार बंद करने के बाद वायरस हो सकता है।पुनरुत्थान", नकल करना जारी रखें।इसलिए, डिस्चार्ज के बाद 2 से 4 सप्ताह के भीतर सप्ताह में एक बार समीक्षा करने की सलाह दी जाती है।

(4) न्यूक्लिक एसिड वायरस का आनुवंशिक पदार्थ है।रोगी को एंटीवायरल उपचार से गुजरने के बाद वायरस मर जाता है, लेकिन शेष वायरल आरएनए टुकड़े अभी भी मानव शरीर में बने रहते हैं, और शरीर से पूरी तरह से बाहर नहीं निकलते हैं।कभी-कभी, कुछ परिस्थितियों में, इसे अधिक बनाए रखा जा सकता है।एक लंबा समय, और इस समय न्यूक्लिक एसिड परीक्षण "क्षणिक" सकारात्मक होगा।रोगी के ठीक होने के समय के विस्तार के साथ, शरीर में शेष आरएनए टुकड़े धीरे-धीरे समाप्त होने के बाद, न्यूक्लिक एसिड परीक्षण का परिणाम नकारात्मक हो सकता है।

(5) SARS-CoV-2 का न्यूक्लिक एसिड परीक्षण परिणाम केवल वायरल आरएनए की उपस्थिति या अनुपस्थिति को साबित करता है, और वायरस की गतिविधि को साबित नहीं कर सकता है और यह भी साबित नहीं कर सकता है कि वायरस संक्रामक है या नहीं।यह साबित करना जरूरी है कि क्या जिस मरीज का न्यूक्लिक एसिड टेस्ट दोबारा पॉजिटिव आया है, वह दोबारा संक्रमण का स्रोत बनेगा या नहीं।यह साबित करने के लिए कि यह संक्रामक है, नैदानिक ​​​​नमूनों पर वायरस कल्चर करना और "जीवित" वायरस विकसित करना आवश्यक है।

सारांश

संक्षेप में, SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड परीक्षण गलत नकारात्मक, पुनः परीक्षण सकारात्मक, और अन्य स्थितियाँ जो नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों के साथ असंगत हैं, उन्हें पूरी तरह से टाला नहीं जा सकता है।वास्तविक स्क्रीनिंग और परीक्षण में, चूक निदान और गलत निदान को रोकने के लिए व्यापक निदान के लिए नैदानिक ​​लक्षणों, इमेजिंग परीक्षाओं (सीटी) और प्रयोग प्रयोगशाला परीक्षण (न्यूक्लिक एसिड परीक्षण + वायरस-विशिष्ट एंटीबॉडी परीक्षण) परिणामों को संयोजित करने की सिफारिश की जाती है।यदि परीक्षण के परिणाम स्पष्ट रूप से नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों के साथ असंगत पाए जाते हैं, तो SARS-CoV-2 वायरस के प्रारंभिक संक्रमण, आवर्ती संक्रमण या अन्य श्वसन वायरस के साथ संयुक्त संक्रमण आदि को बाहर करने के लिए संपूर्ण परीक्षण लिंक (नमूना संग्रह, परिसंचरण और प्रसंस्करण लिंक) का व्यापक विश्लेषण करने की सिफारिश की जाती है।यदि स्थितियाँ अनुमति देती हैं, तो पुन: जांच के लिए अधिक संवेदनशील नमूने जैसे थूक या वायुकोशीय लैवेज द्रव एकत्र करने की सिफारिश की जाती है।

संबंधित उत्पाद:

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन किट (मल्टीप्लेक्स पीसीआर फ्लोरोसेंट जांच विधि)