परिचय:

आरएनए, वैज्ञानिक नाम राइबोन्यूक्लिक एसिड, इसका संक्षिप्त नाम राइबोन्यूक्लिक एसिड से आता है, एक प्रकार का न्यूक्लिक एसिड है जो फॉस्फोडाइस्टर बॉन्ड के माध्यम से कम से कम दर्जनों राइबोन्यूक्लियोटाइड्स को जोड़कर बनता है।

आरएनए की खोज का आधार प्रदूषण मुक्त कुल आरएनए निकालना है, और आरएनए निष्कर्षण के मूल सिद्धांत को मोटे तौर पर निम्नानुसार संक्षेपित किया जा सकता है:

1. सबसे पहले कोशिकाओं को विघटित करें

2. फिर मैक्रोमोलेक्यूलर अशुद्धियाँ (प्रोटीन, लिपिड, डीएनए, आदि) हटा दें।

3. अंत में, लवण और कार्बनिक सॉल्वैंट्स को हटाते समय आरएनए अवक्षेपित होता है, और आरएनए को और शुद्ध करता है

निष्कर्षण विधि का अतीत और वर्तमान

आरएनए निष्कर्षण विधि की पहली पीढ़ी ट्राइज़ोल अवक्षेपण विधि है (प्रयुक्त अभिकर्मकों में गुआनिडीन आइसोथियोसाइनेट, फिनोल, क्लोरोफॉर्म इत्यादि शामिल हैं) का आविष्कार पियोट्र चॉम्ज़िन्स्की और दादी निकोलेटा साकची नामक दादाजी ने किया था, क्योंकि यह आविष्कार आरएनए निष्कर्षण को त्वरित और आसान बनाता है, तब से आरएनए अनुसंधान का उतार-चढ़ाव शुरू हुआ।

बाद में, दादाजी ने इस पेटेंट को इनविट्रोजन को बेच दिया और इनविट्रोजन ने इस पद्धति को दुनिया भर में प्रचारित किया और व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली विधि बन गई।

बाद में, इन्विट्रोजन को थर्मो द्वारा अधिग्रहित कर लिया गया!

प्रतिनिधि उत्पाद: इनविट्रोजन का ट्राइज़ोल अभिकर्मक

हालाँकि, ट्राइज़ोल वर्षा विधि के लिए कई बार वर्षा और आरएनए के निष्कर्षण की आवश्यकता होती है, और उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मक जहरीले होते हैं और संचालित होने में लंबा समय लेते हैं।

इसलिए, दूसरी पीढ़ी की कॉलम-एंजाइम शुद्धि विधि अस्तित्व में आई, जिसमें अन्य अशुद्धियों को दूर करते हुए नमूने में आरएनए की वसूली को अधिकतम करने के लिए एक विशिष्ट न्यूक्लिक एसिड सोखने वाली सामग्री के रूप में सिलिका जेल झिल्ली का उपयोग किया गया।

दूसरी पीढ़ी की विधि स्थिर प्रदर्शन के आधार पर ऑपरेशन को सरल बनाती है, जोखिम कारक को कम करती है और आरएनए निष्कर्षण की दक्षता में सुधार करती है।

प्रतिनिधि उत्पाद: QIAGEN RNeasy और अधिकांश घरेलू उत्पाद

हालाँकि, पहली और दूसरी दोनों पीढ़ी के तरीकों में डीएनए संदूषण को हटाने के लिए DNase के उपयोग की आवश्यकता होती है, जो बाद के डाउनस्ट्रीम प्रयोगों में कुछ असुविधा लाता है।अवशिष्ट DNase रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन की दक्षता को कम कर देगा और प्रथम-स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण को कम कर देगा, जिससे परिणामों की सटीकता प्रभावित होगी।

इसलिए, तीसरी पीढ़ी की निष्कर्षण विधि को दूसरी पीढ़ी के आधार पर अनुकूलित किया जाता है।प्रयोग में किसी भी एंजाइम को जोड़ने की आवश्यकता नहीं है, और आरएनए को केवल दो स्तंभों के साथ आसानी से प्राप्त किया जा सकता है।

कॉलम 1: डीएनए को साफ़ करने के लिए डीएनए-सफाई कॉलम

कॉलम 2: केवल आरएनए कॉलम विशेष रूप से आरएनए को सोखता है और पुनर्प्राप्त करता है

ऐसा सरल ऑपरेशन न केवल समय बचाता है, बल्कि डाउनस्ट्रीम प्रयोगों के संचालन को भी सुविधाजनक बनाता है!

प्रतिनिधि उत्पाद: क्यूजेन आरनेसी प्लस औरफोरजीनआरएनए शुद्धि श्रृंखला उत्पाद

(आरएनईज़ी प्लस)

（फोरजीन काप्लांट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट）

चुपचाप बताओ!फोरेगीन की आरएनए किट एक बेहद आसान उपयोग वाला आरएनएएस इरेज़र भी प्रस्तुत करती है, जो मानव शरीर में किसी भी विषाक्त पदार्थ को शामिल किए बिना, 1 मिनट में ठोस सतह पर 400μg आरएनएएस को पूरी तरह से हटा सकती है!

चित्र1: परिचालन प्रक्रिया तुलना चार्ट

फोरेजीन के उत्पाद केवल दो गानों में आरएनए निष्कर्षण पूरा कर सकते हैं, अपने प्रयोग की प्रगति से दूसरों को ईर्ष्या न करें!

चित्र2:Eप्रायोगिक परिणाम तुलना चार्ट

पहली पीढ़ी (1: ट्राइज़ोल)

दूसरी पीढ़ी (2: QIAGEN की RNeasy)

तीसरी पीढ़ी (3: QIAGEN का RNeasy प्लस, 4: Foregene)

चित्र3: क्यूपीसीआर ग्राफ (प्रवर्धन वक्र ग्राफ)

पहली पीढ़ी (हरे रंग का अर्थ है ट्राइज़ोल -, लाल का अर्थ है ट्राइज़ोल +)

दूसरी पीढ़ी (आसमानी नीला का अर्थ है QIAGEN RNeasy-, लाल का अर्थ है QIAGEN RNeasy +)

तीसरी पीढ़ी (नीले रंग का मतलब QIAGEN RNeasy प्लस, हरे रंग का मतलब Foregene)

(नोट: क्यूपीसीआर ग्राफ़ "-" इंगित करता है कि DNase नहीं जोड़ा गया है और DNA संदूषण हटाया नहीं गया है। इसलिए, CT अधिक है और परिणाम सटीक नहीं है; "+" इंगित करता है कि DNase जोड़ा गया है और DNA संदूषण हटा दिया गया है, परिणाम सटीक है)

प्रत्येक तकनीकी उन्नयन का मतलब है कि प्रयोग का संचालन सरल और अधिक उपयोगकर्ता-अनुकूल दिशा में विकसित हो रहा है।

फोरेजीन का लक्ष्य अधिक वैज्ञानिक शोधकर्ताओं को प्रयोगात्मक समय और लागत बचाने, उच्च गुणवत्ता वाले प्रयोगात्मक परिणाम प्राप्त करने और संयुक्त रूप से अधिक मूल्यवान वैज्ञानिक अनुसंधान उपलब्धियां बनाने में मदद करना है।