लेखक: वांग ज़ियाओयान, झाओ एरीयू

इकाई: जियाओझोउ अस्पताल, टोंगजी विश्वविद्यालय से संबद्ध डोंगफैंग अस्पताल

वर्तमान में, श्वसन रोगज़नक़ न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के लिए मुख्य नमूना प्रकार गले का स्वाब है।आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले कई प्रकार के नमूना संरक्षण समाधान हैं, जिनमें से सभी को परिवहन और भंडारण के लिए प्रशीतित या जमे हुए करने की आवश्यकता होती है;संग्रह और परिवहन प्रक्रिया के दौरान कम तापमान की पूरी प्रक्रिया को नियंत्रित करना मुश्किल है, और नमूना परीक्षण से पहले गुणवत्ता नियंत्रण सुनिश्चित करना मुश्किल है^[1-2].

RNase (RNase) एक एंडोन्यूक्लिज़ है जो RNA को हाइड्रोलाइज़ करता है, मुख्य रूप से न्यूक्लियोटाइड्स के बीच फॉस्फोडिएस्टर बांड को तोड़ता है।RNase अणु बहुत स्थिर है, संरचना में डाइसल्फ़ाइड बंधन हैं, और इसकी गतिविधि के लिए द्विसंयोजक धनायनों की उपस्थिति की आवश्यकता नहीं होती है, इसलिए RNase आसानी से विकृत नहीं होता है, और उच्च तापमान या विकृतीकरण के उपयोग के बाद भी इसे पुन: स्वरूपित करना आसान होता है।RNases को अंतर्जात और बहिर्जात में विभाजित किया गया है।अंतर्जात आरएनएज़ उसी समय जारी किए जा सकते हैं जब कोशिकाएं फट जाती हैं।इसलिए, आरएनए निष्कर्षण प्रक्रिया में अंतर्जात आरएनएएस की भूमिका को समाप्त करना एक बहुत ही महत्वपूर्ण कदम है।बहिर्जात RNases व्यापक रूप से वितरित हैं।आरएनएज़ हवा, मानव त्वचा, बाल और लार में मौजूद होते हैं, जो आरएनए के आसान क्षरण के महत्वपूर्ण कारण हैं^[3].

डेटा क्वेरी

CANS-CL02-A009 तकनीकी आवश्यकताओं में "आणविक निदान के क्षेत्र में चिकित्सा प्रयोगशाला गुणवत्ता और योग्यता प्रत्यायन दिशानिर्देशों का अनुप्रयोग" का प्रस्ताव है कि आवेदन के अनुसार उचित जल गुणवत्ता मानक तैयार किए जाने चाहिए;डिस्पोजेबल वायुरोधी कंटेनर:

RNase/वर्गीकरण

(1) आरएनएसई ए

गोजातीय अग्न्याशय से प्राप्त राइबोन्यूक्लिज़ ए (आरएनएएस ए), एक एंडोरिबोन्यूक्लिज़ है जो विशेष रूप से आरएनए पर पाइरीमिडीन अवशेषों के 3′ छोर पर हमला कर सकता है, आसन्न न्यूक्लियोटाइड द्वारा गठित साइटोसिन या यूरैसिल को काट सकता है।फॉस्फोडिएस्टर बंधन, प्रतिक्रिया का अंतिम उत्पाद 3′ पाइरीमिडीन न्यूक्लियोटाइड और अंत में 3′ पाइरीमिडीन न्यूक्लियोटाइड के साथ एक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड होता है।

(2) RNase T1

राइबोन्यूक्लिज़ T1 (RNase T1) एस्परगिलस ऑर्जे से प्राप्त होता है, यह विशेष रूप से ग्वानिन के 3′-टर्मिनल फॉस्फेट पर कार्य करता है, और दरार स्थल ग्वानिन के 3′ फॉस्फेट और आसन्न न्यूक्लियोटाइड के 5′ हाइड्रॉक्सिल के बीच होता है।प्रतिक्रिया का अंतिम उत्पाद 3′गुआनिलिक एसिड और अंत में 3′गुआनिलिक एसिड के साथ ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड टुकड़े हैं।

(3) आरएनएसई एच

राइबोन्यूक्लिज़ H (RNase H) को सबसे पहले बछड़े के थाइमस ऊतक से खोजा गया था, और इसके एन्कोडिंग जीन को एस्चेरिचिया कोलाई में क्लोन किया गया है।यह विशेष रूप से डीएनए को ख़राब कर सकता है: आरएनए हाइब्रिड डुप्लेक्स में आरएनए स्ट्रैंड्स, जिसके परिणामस्वरूप 3′-ओएच और 5′-मोनोफॉस्फेट सिरों के साथ ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स और मोनोन्यूक्लियोटाइड्स होते हैं, यह सिंगल- या डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए या आरएनए को ख़राब नहीं कर सकता है।

RNase

कार्य एवं उपयोग

राइबोन्यूक्लिज़ राइबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) के क्षरण को उत्प्रेरित कर सकता है और इसे कृत्रिम रूप से संश्लेषित किया जा सकता है।आघात और जोड़ों के दर्द के इलाज के लिए औषधीय मलहम का उपयोग शीर्ष पर किया जाता है।रिपोर्टों के अनुसार, राइबोन्यूक्लिज़ मेजबान कोशिका चयापचय को बदल सकता है, वायरस संश्लेषण को रोक सकता है, इन विट्रो में इन्फ्लूएंजा वायरस के प्रसार को रोक सकता है, और चिकन भ्रूण में वैक्सीनिया और हर्पीस वायरस के गठन को रोक सकता है।180 मिलीग्राम के राइबोन्यूक्लिज़ दैनिक इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन का नैदानिक ​​​​उपयोग, महामारी एन्सेफलाइटिस के उपचार के लिए फायदेमंद है, राइबोन्यूक्लिज़ राइबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) के क्षरण को उत्प्रेरित कर सकता है, और अब इसे कृत्रिम रूप से संश्लेषित किया जा सकता है।आघात और जोड़ों के दर्द के इलाज के लिए औषधीय मलहम का उपयोग शीर्ष पर किया जाता है।रिपोर्टों के अनुसार, राइबोन्यूक्लिज़ मेजबान कोशिका चयापचय को बदल सकता है, वायरस संश्लेषण को रोक सकता है, इन विट्रो में इन्फ्लूएंजा वायरस के प्रसार को रोक सकता है, और चिकन भ्रूण में वैक्सीनिया और हर्पीस वायरस के गठन को रोक सकता है।महामारी एन्सेफलाइटिस के उपचार के लिए 180 मिलीग्राम राइबोन्यूक्लिज़ के दैनिक इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन का नैदानिक ​​​​उपयोग फायदेमंद है।

RNase

अवरोधक परिभाषा

RNase अवरोधक इकाई की परिभाषा: 5ng RNase A की 50% गतिविधि को बाधित करने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा एक इकाई है।

RNase अवरोधक कैसे काम करते हैं

गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट:

गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट आणविक सूत्र C2H6N4S वाला एक कार्बनिक यौगिक है।मुख्य रूप से जैविक चिकित्सा, रासायनिक अभिकर्मकों आदि में उपयोग किया जाता है। गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट एक प्रोटीन लाइसिंग एजेंट है, और इसे अक्सर आणविक निदान अभिकर्मकों में लाइसिस समाधान के मुख्य घटक के रूप में उपयोग किया जाता है।यह ऊतक को नष्ट कर सकता है, कोशिका संरचना को नष्ट कर सकता है और न्यूक्लियोप्रोटीन से न्यूक्लिक एसिड को अलग कर सकता है, और RNase में मजबूत विकृतीकरण कर सकता है।यह वर्तमान में सबसे प्रभावी RNase अवरोधक है।

ट्राइज़ोल एक नया कुल आरएनए निष्कर्षण अभिकर्मक है जो सीधे कोशिकाओं या ऊतकों से कुल आरएनए निकाल सकता है।इसमें फिनोल और गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट जैसे पदार्थ होते हैं, जो कोशिकाओं को तेजी से बाधित कर सकते हैं और कोशिकाओं द्वारा जारी न्यूक्लीज को रोक सकते हैं।

(हालांकि, गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट प्रयोगशाला शोधकर्ताओं के स्वास्थ्य के लिए खतरनाक है।)

आरनासिन:

चूहे के लीवर या मानव ब्लास्टोडर्म से निकाला गया एसिड ग्लाइकोप्रोटीन।Rnasin RNase का एक गैर-प्रतिस्पर्धी अवरोधक है, जो विभिन्न RNases से जुड़कर उन्हें निष्क्रिय कर सकता है।

(अधिक विवरण:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

High तापमान:

उच्च तापमान भी प्रोटीन विकृतीकरण का एक सामान्य साधन है।

डायथाइलपाइरोकार्बोनेट (डीईपीसी):

DEPC एक मजबूत लेकिन अधूरा RNase अवरोधक है, जो प्रोटीन को विकृत करने के लिए RNase सक्रिय समूह के अमीनो एसिड इमिडाज़ोल रिंग के साथ मिलकर RNase गतिविधि को रोक सकता है।

वैनाडिल राइबोन्यूक्लियोसाइड कॉम्प्लेक्स:

वैनेडियम ऑक्साइड आयनों और न्यूक्लियोसाइड्स द्वारा निर्मित एक कॉम्प्लेक्स, जो संक्रमण पदार्थों के रूप में RNase से बंधता है, जो RNase की गतिविधि को लगभग पूरी तरह से रोक सकता है।

अन्य:

एसडीएस, यूरिया, डायटोमेसियस अर्थ आदि का भी RNase पर एक निश्चित निरोधात्मक प्रभाव होता है।

विशेषज्ञ समीक्षाएँ

ली युजी मुख्य तकनीशियन

प्रयोगशाला विभाग के निदेशक, जियाओझोउ अस्पताल, टोंगजी विश्वविद्यालय से संबद्ध डोंगफैंग अस्पताल

बहिर्जात RNase के जैव निम्नीकरण को रोकने के लिए, RNA निष्कर्षण प्रक्रिया के दौरान मास्क, दस्ताने और टोपी को बार-बार पहना और बदला जाना चाहिए।सभी कांच के बर्तनों को सुखाने वाले ओवन में 200°C पर 2 घंटे से अधिक समय तक पकाया जाना चाहिए।बेकिंग के लिए उपयोग की जाने वाली सामग्री, जैसे प्लास्टिक, को डीईपीसी पानी से उपचारित करने की आवश्यकता होती है, और फिर आसुत जल से धोया जाता है।आरएनए के निष्कर्षण, संरक्षण और पहचान के लिए उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मकों या उपकरणों को आरएनए को समर्पित किया जाना चाहिए, और एक स्वतंत्र आरएनए संचालन क्षेत्र स्थापित किया जाना चाहिए।

संदर्भ:

[1] स्मिथ-वॉन एचसी, बिंक्स एमजे, बीस्बार्थ जे, एट अल।स्वदेशी ऑस्ट्रेलियाई बच्चों में तीव्र निचले श्वसन संक्रमण की शुरुआत से तुरंत पहले नासॉफिरिन्क्स में बैक्टीरिया और वायरस [जे]।यूरो जे क्लिन माइक्रोबायोल इंफेक्ट डिस,2018,37 (9): 1785-1794।

[2] चीनी प्रिवेंटिव मेडिसिन एसोसिएशन की अस्पताल संक्रमण नियंत्रण शाखा।क्लिनिकल माइक्रोबियल नमूनों के संग्रह और निरीक्षण के लिए दिशानिर्देश [जे]।चाइनीज़ जर्नल ऑफ़ हॉस्पिटल इन्फेक्शन, 2018(20):3192-3200।

[3] "क्लिनिकल टेस्ट टेन थाउज़ेंड व्हाई मॉलिक्यूलर बायोलॉजी टेस्ट वॉल्यूम"