संभावित समस्याओं का निम्नलिखित विश्लेषणमुखस्वाब/एफटीए card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.
शुद्धिकरण स्तंभ अवरुद्ध हो गया है
इस किट में, जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण ऑपरेशन में, शुद्धिकरण स्तंभ को सेंट्रीफ्यूजेशन चरण के बिना सीधे नमूना एंजाइमैटिक लिसीस मिश्रण पर सोख लिया जाता है, और नमूने के अपूर्ण एंजाइमीकरण और उच्च चिपचिपाहट के कारण शुद्धि स्तंभ अवरुद्ध हो सकता है।
निम्नलिखित संभावित कारण इस प्रकार हैं:
1. ऊतक नमूनों का अधूरा एंजाइमेटिक पाचन।
सिफ़ारिश: फोरजीन प्रोटीज़ का नमूना प्रसंस्करण समय उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है या 12,000 आरपीएम (~ 13,400) पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद सतह पर तैरनेवाला लिया जा सकता है× छ) 5 मिनट के लिए.
2. ऊतक के नमूनों या बड़े ऊतकों का अत्यधिक उपयोग।
सिफ़ारिश: 1 से अधिक न होना सबसे अच्छा हैमुख नमूने में स्वाब;यदि नमूना बहुत बड़ा है, तो तदनुसार बफर एसटी1, फोरजीन प्रोटीज़, बफर एसटी2 की खुराक बढ़ाएँ।
3. नमूना चिपचिपापन बहुत अधिक है।
सिफ़ारिश: जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण से पहले नमूनों को 10 एमएम ट्रिस-एचसीएल के साथ उचित रूप से पतला किया जा सकता है।
4. ब्लड कार्ड के टुकड़े चूस लिए गए हैं.
सिफ़ारिश: रक्त स्थान (एफटीए कार्ड) जीनोमिक निष्कर्षण के चरण 6 के क्षणिक सेंट्रीफ्यूजेशन समय को उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है।
कम उपज या कोई डीएनए नहीं
अक्सर ऐसे कई कारक होते हैं जो जीनोमिक डीएनए उपज को प्रभावित करते हैं, जिनमें नमूना उत्पत्ति, नमूना भंडारण की स्थिति, नमूना तैयार करना, हेरफेर आदि शामिल हैं।
निष्कर्षण के दौरान जीनोमिक डीएनए प्राप्त नहीं किया जा सकता है
संभावित कारण इस प्रकार हैं:
1. नमूनों के अनुचित संरक्षण या बहुत लंबे समय तक भंडारण से जीनोमिक डीएनए का क्षरण होता है।
सिफ़ारिश: मौखिक स्वाब का अधिमानतः ताजा नमूना लिया जाना चाहिए, और जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण कार्यों के लिए संरक्षित स्वाब का उपयोग करना उचित नहीं है;रक्त स्पॉट नमूनों को यह सुनिश्चित करना चाहिए कि गुणवत्ता योग्य है और भंडारण का समय बहुत लंबा नहीं होना चाहिए।
2. बहुत कम ऊतक उपयोग के परिणामस्वरूप संबंधित जीनोमिक डीएनए का निष्कर्षण नहीं हो सकता है।
सिफ़ारिश: का पालन करेंबुक्काऑपरेशन गाइड में स्वाब नमूनाकरण निर्देश, और जितनी बार संभव हो पोंछें ताकि जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण के लिए मौखिक स्वाब से पर्याप्त कोशिकाओं को जोड़ा जा सके;रक्त धब्बा नमूना निष्कर्षण के लिए, रक्त धब्बा काटने वाले क्षेत्र को उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है।
3. फोरजीन प्रोटीज़ को अनुचित तरीके से संरक्षित किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप इसकी गतिविधि में कमी या निष्क्रियता हो जाती है।
सिफ़ारिश: भंडारण की स्थिति की पुष्टि करेंएफएंजाइमी प्रतिक्रिया के लिए ओरेजीन प्रोटीज़ या इसे नए फोरेजीन प्रोटीज़ से बदलें।
4. किट का अनुचित संरक्षण या भंडारण का समय बहुत लंबा है, जिसके परिणामस्वरूप किट के कुछ घटक विफल हो जाते हैं।
सिफ़ारिश: एक नया खरीदेंमुख स्वाब डीएनएएकांत संबंधित प्रक्रियाओं के लिए किट।
5. बफर डब्ल्यूबी पूर्ण इथेनॉल नहीं जोड़ता है।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि बफर डब्ल्यूबी पूर्ण इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ता है।
6. सिलिकॉन फिल्म में एलुएंट सही ढंग से नहीं मिलाया गया है।
सिफ़ारिश: 65 जोड़ेंडिग्री सेल्सियसपहले से गर्म किए गए एलुएंट को सिलिकॉन झिल्ली के बीच में डालें और एलुएंट दक्षता बढ़ाने के लिए कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए छोड़ दें।
Lओउ-यील्ड जीनोमिक डीएनए एकाकी
निम्नलिखित संभावित कारण इस प्रकार हैं:
1. नमूनों के अनुचित संरक्षण या बहुत लंबे समय तक भंडारण से जीनोमिक डीएनए का क्षरण होता है।
सिफ़ारिश: मौखिक स्वाब को अधिमानतः ताजा नमूना लिया जाता है, और संरक्षित स्वाब का उपयोग जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण के लिए नहीं किया जाना चाहिए।
2. यदि ऊतक के नमूने की मात्रा बहुत छोटी है, तो निकाली गई जीनोमिक डीएनए सामग्री कम होगी।
सिफ़ारिश: ऑपरेटिंग गाइड में मौखिक स्वाब नमूनाकरण निर्देशों का पालन करें, जितनी बार संभव हो पोंछें ताकि जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण के लिए मौखिक स्वाब से पर्याप्त कोशिकाओं को जोड़ा जा सके।
3. फोरजीन प्रोटीज़ को अनुचित तरीके से संरक्षित किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप इसकी गतिविधि में कमी या निष्क्रियता हो जाती है।
सिफ़ारिश: भंडारण की स्थिति की पुष्टि करेंthe Fओरेजीन प्रोटीज़ या इसे एक नए से बदलें एंजाइमी प्रतिक्रिया के लिए फोरजीन प्रोटीज़।
4. एलुएंट समस्याएं.
सिफ़ारिश: निक्षालन के लिए बफर ईबी का उपयोग करें;यदि डीडीएच का उपयोग कर रहे हैं2ओ या अन्य निक्षालक, पुष्टि करें कि निक्षालक का पीएच 7.0-8.5 के बीच है।
5. एलुएट को बूंद-बूंद करके सही ढंग से नहीं जोड़ा गया है।
सिफ़ारिश: सिलिकॉन झिल्ली के बीच में एलुएंट बूंदें डालें और एलुएंट दक्षता बढ़ाने के लिए कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए छोड़ दें।
6. निक्षालन द्रव बहुत कम जमा होता है।
सिफ़ारिश: कम से कम निर्देशों में बताई गई आवश्यकता के अनुसार जीनोमिक डीएनए निक्षालन के लिए एलुएंट का उपयोग करेंकम नहीं 15 से अधिकμl.
Lओउ पवित्रता of जीनोमिक डीएनएएकाकी
कम जीनोमिक डीएनए शुद्धता से डाउनस्ट्रीम प्रयोगों की विफलता या असंतोषजनक परिणाम हो सकते हैं, जैसे: एंजाइमों को काटा नहीं जा सकता, पीसीआर को रुचि का जीन टुकड़ा नहीं मिल सकता है, आदि।
संभावित कारण इस प्रकार हैं:
1. हेटरोप्रोटीन प्रदूषण, आरएनए प्रदूषण।
विश्लेषण: शुद्धि स्तंभ को बफ़र पीडब्लू का उपयोग करके नहीं धोया गया था;बफ़र पीडब्लू वॉश शुद्धिकरण कॉलम को सही केन्द्रापसारक गति का उपयोग करके नहीं धोया गया था।
सिफ़ारिश: इथेनॉल जोड़ने से पहले सुनिश्चित करें कि सतह पर तैरनेवाला में कोई अवक्षेपण न हो;निर्देशों के अनुसार शुद्धि स्तंभ को धोना सुनिश्चित करें, और इस चरण को छोड़ा नहीं जा सकता है।
2. अशुद्धि आयन प्रदूषण.
विश्लेषण: बफर डब्ल्यूबी वॉश शुद्धि कॉलम को छोड़ दिया गया या केवल एक बार धोया गया, जिसके परिणामस्वरूप अवशिष्ट आयनिक संदूषण हुआ।
सिफ़ारिश: जितना संभव हो सके अवशिष्ट आयनों को हटाने के लिए निर्देशानुसार बफर डब्ल्यूबी को 2 बार धोना सुनिश्चित करें।
3. आरएनए एंजाइम संदूषण।
विश्लेषण: विदेशी RNases को बफ़र में जोड़ा गया;बफ़र पीडब्लू वॉश ऑपरेशन गलत था, जिसके परिणामस्वरूप आरएनएएस अवशेष बने, जिससे डाउनस्ट्रीम आरएनए प्रयोगात्मक संचालन प्रभावित हुए, जैसे कि इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन।
सिफ़ारिश: फोरजीन श्रृंखला न्यूक्लिक एसिडइसोलाtion किट RNase को अतिरिक्त जोड़े बिना RNA को हटा सकते हैं,इस प्रकार बुक्कल स्वाब/एफटीए कार्ड डीएनए आइसोलेशन किटजरुरत't RNase जोड़ें;बफ़र पीडब्लू वाशिंग शुद्धिकरण कॉलम के निर्देशों का पालन करना सुनिश्चित करें, और इस चरण को छोड़ा नहीं जा सकता है।
4. इथेनॉल अवशेष।
विश्लेषण: बफर डब्ल्यूबी ने शुद्धि स्तंभ को धोने के बाद खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन नहीं किया।
सिफ़ारिश: निर्देशों के अनुसार सही खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन ऑपरेशन करें।
5. अन्य अशुद्धता प्रदूषण.
विश्लेषण: सहेजे गए नमूनों या विशेष नमूनों का पूर्व उपचार नहीं किया जाता है।
सिफ़ारिश: निर्देशानुसार नमूने का पूरी तरह से पूर्व-उपचार करें।
पोस्ट करने का समय: मार्च-18-2022
