पीसीआर प्रतिक्रिया की उत्कृष्ट विशेषता इसकी बड़ी प्रवर्धन क्षमता और अत्यधिक उच्च संवेदनशीलता है।पीसीआर प्रदर्शन और पहचान दक्षता में सुधार करने के लिए, हम पीसीआर प्रवर्धन क्षमता और पहचान संवेदनशीलता में सुधार करने के लिए प्रतिबद्ध हैं, लेकिन सिरदर्द प्रयोग की प्रक्रिया में है।गलत सकारात्मकताएं अक्सर होती हैं, और बहुत कम मात्रा में नमूना क्रॉस-संदूषण या पीसीआर उत्पाद संदूषण प्रयोग में गलत सकारात्मकता का कारण बन सकता है।
पीसीआर उत्पाद संदूषण के पांच प्रकार
पीसीआर संदूषण के कई कारण हैं, जिन्हें मोटे तौर पर निम्नलिखित श्रेणियों में विभाजित किया जा सकता है:
नमूना संदूषण मुख्य रूप से नमूना एकत्र करने के लिए कंटेनर के संदूषण के कारण होता है, या जब नमूना रखा जाता है, तो यह ढीली सीलिंग के कारण कंटेनर से बाहर लीक हो जाता है, या नमूना कंटेनर के बाहर चिपक जाता है, जो क्रॉस-संदूषण का कारण बनता है;संदूषण से नमूनों के बीच संदूषण होता है;कुछ माइक्रोबियल नमूने, विशेष रूप से वायरस, एरोसोल के साथ फैल सकते हैं या एरोसोल बना सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप पारस्परिक संदूषण हो सकता है।
मुख्य कारण यह है कि पीसीआर अभिकर्मकों की तैयारी के दौरान, नमूना बंदूक, कंटेनर, डबल आसुत जल और अन्य समाधान पीसीआर न्यूक्लिक एसिड टेम्पलेट द्वारा दूषित हो जाते हैं।
आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं और कुछ प्रयोगशालाओं में जो क्लोन प्लास्मिड को सकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपयोग करते हैं, क्लोन प्लास्मिड संदूषण की समस्या भी आम है।क्योंकि इकाई मात्रा में क्लोनिंग प्लास्मिड की सामग्री काफी अधिक है, और शुद्धिकरण प्रक्रिया में अधिक उपकरण और अभिकर्मकों की आवश्यकता होती है, और जीवित कोशिकाओं की मजबूत वृद्धि और प्रजनन क्षमता के कारण जीवित कोशिकाओं में प्लास्मिड के दूषित होने की बहुत संभावना है।
प्रवर्धित उत्पादों का संदूषण पीसीआर प्रतिक्रियाओं में सबसे आम संदूषण समस्या है।क्योंकि पीसीआर उत्पाद की कॉपी मात्रा बड़ी है (आम तौर पर 1013 प्रतियां/एमएल), जो पीसीआर डिटेक्शन कॉपी संख्या की सीमा से कहीं अधिक है, पीसीआर उत्पाद संदूषण की बहुत कम मात्रा झूठी सकारात्मकता का कारण बन सकती है।
एरोसोल प्रदूषण पीसीआर उत्पादों के संदूषण का सबसे संभावित रूप है, और इसे अनदेखा करना भी सबसे आसान है।इसका निर्माण तरल सतह और हवा के बीच घर्षण से होता है।आम तौर पर, एयरोसोल संदूषण तब बन सकता है जब ढक्कन खोला जाता है, जब नमूना एस्पिरेट किया जाता है, या यहां तक कि जब प्रतिक्रिया ट्यूब को जोर से हिलाया जाता है।गणना के अनुसार, एक एरोसोल कण में 48,000 प्रतियां हो सकती हैं, इसलिए इससे होने वाला प्रदूषण एक ऐसी समस्या है जिस पर विशेष ध्यान देने की आवश्यकता है।
विशेष रूप से, परीक्षण प्रयोगशालाएँ एक निश्चित जीन का परीक्षण करने के लिए अक्सर प्राइमरों की एक ही जोड़ी का उपयोग करती हैं।समय के साथ, प्रयोगशाला स्थान में बड़ी मात्रा में पीसीआर उत्पाद संदूषण होगा।एक बार ऐसा संदूषण हो जाए तो उसे कम समय में खत्म करना मुश्किल होता है।
पहले तीन प्रकार के प्रदूषण से बचने के लिए हम प्रभावी साधनों का उपयोग कर सकते हैं, लेकिन पीसीआर उत्पादों से होने वाले प्रदूषण को रोकना मुश्किल है, खासकर गैर-मानक पीसीआर प्रयोगशालाओं के निर्माण में।पीसीआर प्रक्रिया में, जब पिपेट टिप तरल को चूसती है और उड़ाती है, और पीसीआर ट्यूब कवर खोला जाता है, तो एक एयरोसोल बन जाएगा।एरोसोल द्वारा ले जाए गए डीएनए अणु (एक एयरोसोल हजारों डीएनए ले जा सकता है) को खत्म करना मुश्किल है क्योंकि वे हवा में तैरते हैं।एक बार जब पीसीआर प्रयोगों का अगला दौर शुरू हो जाएगा, तो झूठी सकारात्मकताएं अनिवार्य रूप से घटित होंगी।
जैसा कि नीचे दिए गए चित्र में दिखाया गया है, नकारात्मक नियंत्रण ने ब्याज के संगत बैंड को भी बढ़ाया:
पीसीआर प्रदूषण और रोकथाम के इस मुद्दे का पहला भाग यहां प्रस्तुत किया गया है।अगला अंक आपके लिए दूसरा भाग "पीसीआर उत्पाद संदूषण की रोकथाम" लाएगा, इसलिए बने रहें!
पोस्ट करने का समय: जुलाई-25-2017
