प्रयोग कर्मियों के व्यवहार को मानकीकृत करने के लिए पीसीआर प्रयोग एसओपी स्थापित करें।
प्रयोगकर्ता संचालन प्रक्रियाओं का सख्ती से पालन करता है, और मानवीय कारकों के कारण होने वाले पीसीआर प्रदूषण को कम करता है या प्रदूषण की घटना को रोकता है।इसके अलावा, प्रयोगकर्ता के पास संबंधित पेशेवर ज्ञान और कौशल होना चाहिए, जिसमें संबंधित उपकरणों के संचालन में दक्षता, संपूर्ण कार्य प्रक्रिया को स्पष्ट करना, संदूषण के उपचार के तरीकों और प्रयोगशाला गुणवत्ता नियंत्रण विधियों में महारत हासिल करना और परीक्षण परिणामों की सही व्याख्या करने में सक्षम होना शामिल है।
एक मानक पीसीआर प्रयोगशाला स्थापित करें।
पीसीआर प्रयोगशाला को सैद्धांतिक रूप से चार क्षेत्रों में विभाजित किया गया है, अर्थात् अभिकर्मक तैयारी क्षेत्र, नमूना प्रसंस्करण क्षेत्र, प्रवर्धन क्षेत्र और प्रवर्धन उत्पाद विश्लेषण क्षेत्र।पहले दो क्षेत्र प्रवर्धन-पूर्व क्षेत्र हैं, और अंतिम दो क्षेत्र प्रवर्धन-पश्चात क्षेत्र हैं।पूर्व-प्रवर्धन क्षेत्र और बाद-प्रवर्धन क्षेत्र को सख्ती से अलग किया जाना चाहिए।प्रायोगिक सामग्री, अभिकर्मक, रिकॉर्डिंग पेपर, पेन, सफाई सामग्री आदि केवल पूर्व-प्रवर्धन क्षेत्र से प्रवर्धन के बाद के क्षेत्र में प्रवाहित हो सकते हैं, अर्थात अभिकर्मक तैयारी क्षेत्र → नमूना प्रसंस्करण क्षेत्र → प्रवर्धन क्षेत्र → प्रवर्धन उत्पाद विश्लेषण क्षेत्र से, और पीछे की ओर प्रवाहित नहीं होना चाहिए।प्रयोगशाला में वायु प्रवाह भी पूर्व-प्रवर्धन क्षेत्र से प्रवर्धन के बाद के क्षेत्र की ओर प्रवाहित होना चाहिए, न कि पीछे की ओर प्रवाहित होना चाहिए।आदर्श पीसीआर प्रयोगशाला डिज़ाइन नीचे दिखाया गया है:
चित्र ए: बफर रूम में नकारात्मक दबाव के साथ आदर्श पीसीआर प्रयोगशाला सेटअप मोड
चित्र बी: बफर रूम में सकारात्मक दबाव के साथ आदर्श पीसीआर प्रयोगशाला सेटअप मोड
चित्र ए और चित्र बी में दिए गए पीसीआर प्रयोगशाला सेटअप आरेख एक अधिक आदर्श सेटअप मोड होना चाहिए, और शर्तों वाली प्रयोगशाला डिजाइन के लिए इस मोड का उल्लेख कर सकती है।सामान्य प्रयोगशालाओं के लिए, यह अनुशंसा की जाती है कि पीसीआर प्रवर्धन क्षेत्र और उत्पाद विश्लेषण क्षेत्र को अलग किया जा सकता है, और नमूना तैयारी क्षेत्र और पीसीआर प्रवर्धन क्षेत्र में कवर का उद्घाटन जितना संभव हो उतना कम किया जाना चाहिए।याद रखें: उत्पाद विश्लेषण क्षेत्र में उत्पादों और प्रायोगिक आपूर्ति को नमूना तैयारी क्षेत्र और पीसीआर प्रवर्धन क्षेत्र में ले जाने की सख्त मनाही है।
यदि प्रयोगशाला केवल पीसीआर का पता लगाने और पहचान करती है, तो पारंपरिक पीसीआर के बजाय फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।
प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर पहचान परिणामों को प्रतिदीप्ति संकेतों द्वारा एकत्र और विश्लेषण किया जा सकता है, इसलिए प्रतिक्रिया के बाद वैद्युतकणसंचलन के लिए ढक्कन खोलने की आवश्यकता नहीं है, जो एरोसोल बनाने के लिए प्रतिक्रिया उत्पादों के रिसाव के कारण होने वाले पीसीआर उत्पाद संदूषण से बचाता है।यदि आप जेल वैद्युतकणसंचलन के लोडिंग चरण के दौरान कैप के खुलने की संख्या बढ़ाते हैं, तो एयरोसोल संदूषण होने की संभावना है।मात्रात्मक पीसीआर के अनुप्रयोग को बढ़ावा देने और धीरे-धीरे गुणात्मक पीसीआर को प्रतिस्थापित करने की सिफारिश की गई है।
पीसीआर प्रतिक्रिया के लिए यूएनजी एंटी-पीसीआर उत्पाद संदूषण प्रणाली का उपयोग किया जाता है।
सिस्टम dTTP के बजाय dUTP का उपयोग करता है।पीसीआर प्रतिक्रिया के बाद, सभी पीसीआर उत्पादों (डीएनए टुकड़े) को डीयूटीपी के साथ शामिल किया जाता है;पीसीआर प्रतिक्रिया के अगले दौर में, सिस्टम में जोड़े गए यूएनजी एंजाइम को पीसीआर से पहले 5 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है, जो विशेष रूप से डीयूटीपी युक्त सभी डीएनए टुकड़ों को ख़राब कर सकता है, और फिर पीसीआर प्रतिक्रिया कर सकता है।यह पीसीआर उत्पादों के कारण होने वाले एयरोसोल संदूषण को पूरी तरह से हटा सकता है।प्रभाव नीचे चित्र में दिखाया गया है:
नोट: प्रत्यक्ष पीसीआर श्रृंखला के लिए, आप फोरजीन के एंटी-पीसीआर उत्पाद संदूषण प्रणाली की श्रृंखला के उत्पाद चुन सकते हैंसुझाव देना
बड़े पैमाने पर जीनोटाइपिंग परीक्षण करने वाली प्रयोगशालाओं के लिए, उचित प्रयोगशालाओं के निर्माण के अलावा अभिकर्मकों के परीक्षण के लिए यूएनजी एंटी-पीसीआर उत्पाद संदूषण प्रणाली का उपयोग करने की दृढ़ता से अनुशंसा की जाती है।
अनुस्मारक: इस प्रणाली का उपयोग पहले से ही उत्पन्न पीसीआर उत्पाद संदूषण को दूर नहीं कर सकता है।इसलिए, प्रासंगिक परीक्षण की शुरुआत में यूएनजी प्रणाली का उपयोग किया जाना चाहिए, और पीसीआर प्रवर्धन के लिए यूएनजी प्रणाली का उपयोग किया जाना चाहिए, ताकि पीसीआर उत्पादों के गलत सकारात्मक संदूषण को रोका जा सके।
बड़े पैमाने पर परीक्षण करते समय फोरजीन की डायरेक्ट पीसीआर-यूएनजी प्रणाली का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, जैसे:
प्लांट लीफ डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी；
प्लांट सीड डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी；
पशु ऊतक डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी；
माउस टेल डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी；
ज़ेबरा फिश डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी。
फोरजीन से किटों की यह श्रृंखलायह न केवल पीसीआर का शीघ्रता से और बड़े पैमाने पर पता लगा सकता है, बल्कि पीसीआर उत्पाद संदूषण को प्रभावी ढंग से रोक और नियंत्रित भी कर सकता है।
पोस्ट करने का समय: मार्च-19-2021
