हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।साधारण डीएनए पोलीमरेज़ की तुलना में, हॉट-स्टार्ट टाक एंजाइम प्रभावी ढंग से कुछ गैर-विशिष्ट प्रवर्धन और प्राइमर डिमर्स के गठन से बच सकता है, और लक्ष्य जीन प्रवर्धन की सफलता दर में प्रभावी ढंग से सुधार कर सकता है।विशेष रूप से आनुवंशिक परीक्षण के क्षेत्र में, हॉट-स्टार्ट टाक एंजाइम को उद्योग में एक अनिवार्य मानक के रूप में पहचाना गया है, और साधारण डीएनए पोलीमरेज़ का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए।जैसा कि ऊपर से देखा जा सकता है, हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।वर्तमान में, घरेलू बाजार में हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइमों के कई ब्रांड हैं, लेकिन उच्च गुणवत्ता वाले कई हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम नहीं हैं।इतने सारे हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम उत्पादों का सामना करते हुए, हमें कैसे चुनना चाहिए?

1. उच्च प्रवर्धन दक्षता वाले हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम का चयन करें

पीसीआर प्रवर्धन दक्षता टैक एंजाइम के प्रदर्शन से निकटता से संबंधित है।एक अच्छे टैक एंजाइम प्रतिक्रिया प्रणाली को अनुकूलित करने के बाद, प्रवर्धन दक्षता 95% से ऊपर है, और प्रारंभिक टेम्पलेट राशि की प्रवर्धन सीमा व्यापक है।लक्ष्य जीन सामग्री कम होने पर संतोषजनक प्रवर्धन प्राप्त किया जा सकता है, और जब टेम्पलेट मात्रा अधिक होती है, और घातीय प्रवर्धन अवधि लंबी होती है, तो जहर देना आसान नहीं होता है।खराब प्रदर्शन वाले टाक एंजाइम के लिए, भले ही प्रतिक्रिया प्रणाली को कई बार अनुकूलित किया गया हो, प्रवर्धन दक्षता अभी भी 90% से कम है, प्रवर्धन वक्र का "एस" आकार स्पष्ट नहीं है, ढलान छोटा है, और वक्र सपाट है।जब टेम्पलेट की मात्रा कम होती है, तो इसे प्रवर्धित नहीं किया जा सकता है, और जब टेम्पलेट की मात्रा अधिक होती है, तो प्रवर्धन प्रभाव आदर्श नहीं होता है।इसलिए, उच्च प्रवर्धन दक्षता वाले डीएनए पोलीमरेज़ का चयन पीसीआर और क्यूपीसीआर की सफलता के लिए महत्वपूर्ण है।

2. मजबूत एंजाइम शक्ति वाले हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम का चयन करें

टाक एंजाइम की एंजाइमैटिक शक्ति प्रवर्धन दक्षता से संबंधित है।आम तौर पर, हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम की एंजाइमैटिक शक्ति जितनी मजबूत होती है, पीसीआर प्रवर्धन की घातीय वृद्धि अवधि उतनी ही लंबी होती है, अधिक विशिष्ट 'एस-आकार' वक्र, प्रतिदीप्ति संकेत मूल्य जितना अधिक होता है, और मल्टीप्लेक्स पीसीआर डिटेक्शन के लिए अधिक उपयुक्त होता है।कमजोर एंजाइमेटिक शक्ति वाले ब्रांड डीएनए पोलीमरेज़ आम तौर पर केवल 2-प्लेक्स प्रतिक्रियाओं का समर्थन कर सकते हैं।3-प्लेक्स प्रतिक्रियाएं करते समय, प्रवर्धन वक्र कम होता है, प्रतिदीप्ति संकेत मान कम होता है, और कोई विशिष्ट प्रवर्धन वक्र नहीं होता है, इसलिए परिणामों का आकलन करना मुश्किल होता है।

3. उच्च संवेदनशीलता वाला हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम चुनें

सामान्यतया, डीएनए पोलीमरेज़ में उच्च प्रवर्धन दक्षता और उच्च संवेदनशीलता होती है, लेकिन इसमें विसंगतियां भी हैं।यदि प्रवर्धित किए जाने वाले नमूने की लक्ष्य जीन बहुतायत कम है, तो टैक एंजाइम की प्रवर्धन संवेदनशीलता का परीक्षण करने की सिफारिश की जाती है।सबसे आम पता लगाने की विधि लक्ष्य जीन प्लास्मिड टुकड़े के 10-गुना या 5-गुना क्रमिक कमजोर पड़ने को अंजाम देना, कम कमजोर पड़ने पर पीसीआर का पता लगाना और उच्च पहचान संवेदनशीलता के साथ हॉट-स्टार्ट टाक एंजाइम का चयन करना है।

उपरोक्त से यह देखा जा सकता है कि शोधकर्ताओं को अपनी प्रयोगात्मक आवश्यकताओं और वित्त पोषण स्थितियों के अनुसार चयन करने की आवश्यकता है।हॉट-स्टार्ट टैक एंजाइम की प्रवर्धन दक्षता और संवेदनशीलता का पता लगाने के लिए ग्रेडिएंट कमजोर पड़ने वाले प्रवर्धन प्रयोग करना सबसे अच्छा है।

फोरजीन का एक उदाहरण'एस टाक डीएनए पोलीमरेज़:

फोरेसी एचएस टैक डीएनए पोलीमरेज़

विवरण

फ़ॉरेसी एचएस टैक डीएनए पॉलीमरेज़ एक डीएनए पॉलीमरेज़ है जो जीन पुनर्संयोजन तकनीक द्वारा एस्चेरिचिया कोली इंजीनियरिंग बैक्टीरिया में व्यक्त किया जाता है।एंजाइम को एक अद्वितीय प्रतिक्रिया बफ़र के साथ जोड़ा जाता है, जो उत्पाद को अत्यधिक प्रतिरोधी और संगत बनाता है, और प्रतिक्रियाओं का पता लगाने के लिए एक टेम्पलेट के रूप में सीधे नमूना लाइसेट (फोरजीन लिसिस सिस्टम) का उपयोग कर सकता है।

आवेदन

शुद्ध किए गए टेम्पलेट्स और गैर-शुद्ध टेम्पलेट्स का गुणात्मक पीसीआर और मात्रात्मक पीसीआर पता लगाना।

गुणवत्ता नियंत्रण

1.कोई बहिर्जात न्यूक्लियस गतिविधि का पता नहीं चला

2. होस्ट के बिना अवशिष्ट जीनोमिक डीएनए का पता लगाने के लिए पीसीआर विधि

3.यह मानव जीनोम में एकल-प्रतिलिपि जीन को प्रभावी ढंग से बढ़ा सकता है

4. एक सप्ताह के लिए कमरे के तापमान पर स्टोर करें, कोई स्पष्ट गतिविधि नहीं बदलती

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