नेतृत्व करना

लंबा गैर-कोडिंग आरएनए, एलएनसीआरएनए एक गैर-कोडिंग आरएनए है जिसकी लंबाई 200 न्यूक्लियोटाइड से अधिक होती है, आमतौर पर 200-100000 एनटी के बीच।एलएनसीआरएनए एपिजेनेटिक, ट्रांसक्रिप्शन और पोस्ट-ट्रांसक्रिप्शनल स्तरों पर जीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है, और एक्स क्रोमोसोम साइलेंसिंग, जीनोम इंप्रिंटिंग और क्रोमैटिन संशोधन, ट्रांसक्रिप्शन सक्रियण, ट्रांसक्रिप्शन हस्तक्षेप, परमाणु परिवहन, सेल चक्र विनियमन, सेल भेदभाव विनियमन और खुराक मुआवजा प्रभाव (खुराक मुआवजा प्रभाव) में भाग लेता है और कई अन्य महत्वपूर्ण विनियमन प्रक्रियाएं मानव रोगों की घटना, विकास और रोकथाम से निकटता से संबंधित हैं, और वर्तमान में बायोमेडिसिन के क्षेत्र में हॉट स्पॉट में से एक हैं।

01  एलएनसीआरएनए के प्रकार और विशेषताएं

lncRNA को इसके गठन के विभिन्न स्रोतों के अनुसार कई प्रकारों में विभाजित किया गया है, जैसा कि ऊपर चित्र में दिखाया गया है।निम्नलिखित विशेषताएं हैं:

1. एलएनसीआरएनए आमतौर पर लंबे होते हैं, विभेदन के दौरान गतिशील अभिव्यक्ति और विभिन्न स्प्लिसिंग विधियों के साथ
2. कोडिंग जीन की तुलना में, lncRNA में आमतौर पर अभिव्यक्ति का स्तर कम होता है
3. अधिकांश एलएनसीआरएनए में ऊतक विभेदन और विकास की प्रक्रिया में स्पष्ट अस्थायी और स्थानिक अभिव्यक्ति विशिष्टता होती है
4. ट्यूमर और अन्य बीमारियों में विशिष्ट अभिव्यक्तियाँ होती हैं
5. lncRNA के उपकोशिकीय स्थान विविध हैं
6. अनुक्रम संरक्षण में कम है, लेकिन फ़ंक्शन में संरक्षण आदि की एक निश्चित डिग्री है।

02 LncRNA रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के बारे में अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

कोशिकाओं में एलएनसीआरएनए की कम सामग्री, लंबी लंबाई और उच्च-स्तरीय संरचना के कारण, ऐसे आरएनए में अक्सर स्टेम लूप या हेयरपिन जैसी जटिल संरचनाएं होती हैं, और आरटी-क्यूपीसीआर असफल रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन या कम दक्षता की समस्याओं से ग्रस्त होता है।

03 LncRNA रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन समाधान

केंद्रीय नियम में, एक टेम्पलेट के रूप में आरएनए का उपयोग करके डीएनए को संश्लेषित करने के लिए आरएनए वायरस द्वारा अपने स्वयं के रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का उपयोग करने की प्रक्रिया को रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन कहा जाता है।इन विट्रो में सीडीएनए टेम्पलेट को संश्लेषित करने के लिए आरएनए वायरस रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का उपयोग करने की प्रक्रिया को रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन कहा जाता है।रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम में शामिल मुख्य तत्व: आरएनए टेम्पलेट, रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, प्राइमर और अन्य घटक।

1.आरएनए टेम्पलेट

रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पर आरएनए टेम्पलेट का प्रभाव इसकी संरचना, शुद्धता और अखंडता में परिलक्षित होता है।निकाले गए आरएनए की शुद्धता और अखंडता जितनी अधिक होगी, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन की दक्षता उतनी ही अधिक होगी और बाद के मात्रात्मक परिणाम अधिक सटीक होंगे।आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले आरएनए निष्कर्षण अभिकर्मकों द्वारा शुद्ध किए गए आरएनए में अक्सर अल्कोहल और गुआनिडीन लवण के अवशेष होते हैं, जिनका अधिकांश रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पर एक मजबूत निरोधात्मक प्रभाव होता है।

2.रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस

संपूर्ण रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम में रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का महत्वपूर्ण प्रभाव होता है।अधिकांश प्रयोगशालाओं में उपयोग किए जाने वाले रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस के लिए उपयुक्त तापमान आम तौर पर 42°C होता है।वास्तव में, उच्च-स्तरीय आरएनए संरचना के उद्घाटन के लिए उच्च तापमान की आवश्यकता होती है, और रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस की आवश्यकताएं अधिक होती हैं।

3.भजन की पुस्तक

रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्राइमरों में जीन-विशिष्ट प्राइमर, यादृच्छिक प्राइमर और ओलिगो डीटी प्राइमर शामिल हैं।अधिकांश एलएनसीआरएनए में पॉलीए टेल्स नहीं होते हैं, और ओलिगो डीटी के साथ यादृच्छिक प्राइमरों का उचित मिलान करना महत्वपूर्ण है।

4. अन्य घटक

इस तथ्य को ध्यान में रखते हुए कि आरएनए को ख़राब करना विशेष रूप से आसान है, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम में घटकों की शुरूआत को कम किया जा सकता है, जो आरएनएएस के प्रवेश को प्रभावी ढंग से रोक सकता है और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन की सुचारू प्रगति सुनिश्चित कर सकता है।

Fओरेजीनआरएनए टेम्प्लेट से प्राप्त होता है, क्यूपीसीआर में रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन

अपने एलएनसीआरएनए डिटेक्शन को व्यापक रूप से एस्कॉर्ट करें

पशु कुल आरएनए Iसांत्वनाकिट (जीडीएनए निष्कासन कॉलम के साथ)

सेल कुल आरएनए Iसांत्वनाकिट (जीडीएनए निष्कासन कॉलम के साथ)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase के साथ) (lncRNA से प्रथम-स्ट्रैंड cDNA संश्लेषण के लिए सुपर प्रीमिक्स)

रियल टाइम पीसीआर EasyTM-SYBR ग्रीन I

Aफायदे ofआरएनए निष्कर्षण:

किट तीसरी पीढ़ी की आरएनए निष्कर्षण तकनीक का उपयोग करती है, DNase का उपयोग करने की कोई आवश्यकता नहीं है।

96, 24, 12, और 6-अच्छी तरह से प्लेट संवर्धित कोशिकाओं से 11 मिनट, जीडीएनए मुक्त, उच्च शुद्धता, उच्च गुणवत्ता वाले कुल सेल आरएनए का उच्च दक्षता निष्कर्षण।

एलएनसीआरएनए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लाभ:

जीनोमिक डीएनए संदूषण को शीघ्रता से हटाने के लिए LncRNA के लिए विशेष रूप से एक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रणाली विकसित की गई है।

रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम में उच्च तापीय स्थिरता होती है और 50°C पर भी इसका रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रदर्शन अच्छा होता है।

उच्च जीसी सामग्री और जटिल माध्यमिक संरचना वाले टेम्पलेट्स को उच्च दक्षता के साथ उलटा किया जा सकता है।

लाभof qपीसीआर:

हॉट स्टार्ट फोरजीन टैक पॉलीमरेज़ में उच्च प्रवर्धन दक्षता, उच्च प्रवर्धन संवेदनशीलता और उच्च प्रवर्धन विशिष्टता है

अनुकूलित रियल पीसीआर इज़ी मिक्स एसवाईबीआर ग्रीन I को उच्च पहचान संवेदनशीलता बनाता है, और इसकी प्रतिदीप्ति तीव्रता समान उत्पादों की तुलना में 3-5 गुना है, जो विभिन्न प्रकार के प्रतिदीप्ति मात्रात्मक प्रयोगों की जरूरतों को पूरा कर सकती है।