सीटी वैल्यू फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर का सबसे महत्वपूर्ण परिणाम प्रस्तुतिकरण रूप है।इसका उपयोग जीन अभिव्यक्ति अंतर या जीन प्रतिलिपि संख्या की गणना करने के लिए किया जाता है।तो प्रतिदीप्ति परिमाणीकरण का सीटी मान क्या उचित माना जाता है?सीटी मान की प्रभावी सीमा कैसे सुनिश्चित करें?

सीटी वैल्यू क्या है?
क्यूपीसीआर प्रवर्धन प्रक्रिया के दौरान, जब प्रवर्धित उत्पाद का प्रतिदीप्ति संकेत निर्धारित प्रतिदीप्ति सीमा तक पहुँच जाता है, तो प्रवर्धन चक्रों (साइकिल थ्रेशोल्ड) की संगत संख्या।C का मतलब साइकिल है और T का मतलब थ्रेशोल्ड है।सीधे शब्दों में कहें तो, सीटी मान उन चक्रों की संख्या है जो प्रारंभिक टेम्पलेट प्रवर्धन qपीसीआर में उत्पाद की एक निश्चित मात्रा तक पहुंचने के अनुरूप होता है।तथाकथित "उत्पाद की एक निश्चित मात्रा" को बाद में और समझाया जाएगा।

Ct मान क्या करता है?

1.घातांकीय प्रवर्धन, टेम्पलेट राशि और सीटी मान के बीच संबंध
आदर्श रूप से, क्यूपीसीआर में जीन एक निश्चित संख्या में चक्रों के बाद घातीय प्रवर्धन द्वारा जमा होते हैं।प्रवर्धन चक्रों की संख्या और उत्पादों की मात्रा के बीच संबंध है: प्रवर्धित उत्पाद राशि = प्रारंभिक टेम्पलेट राशि × (1+एन) चक्र संख्या।हालाँकि, क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया हमेशा आदर्श स्थिति में नहीं होती है।जब प्रवर्धित उत्पाद की मात्रा "निश्चित उत्पाद मात्रा" तक पहुंच जाती है, तो इस समय चक्रों की संख्या सीटी मान होती है, और यह घातीय प्रवर्धन अवधि में होती है।सीटी मान और प्रारंभिक टेम्पलेट की मात्रा के बीच संबंध: टेम्पलेट के सीटी मान और टेम्पलेट की प्रारंभिक प्रतिलिपि संख्या के लघुगणक के बीच एक रैखिक संबंध है।प्रारंभिक टेम्प्लेट सांद्रता जितनी अधिक होगी, सीटी मान उतना ही छोटा होगा;प्रारंभिक टेम्प्लेट सांद्रता जितनी कम होगी, Ct मान उतना ही बड़ा होगा।

2. प्रवर्धन वक्र, प्रतिदीप्ति सीमा और निश्चित पीसीआर उत्पाद मात्रा
क्यूपीसीआर प्रवर्धन उत्पाद की मात्रा सीधे फ्लोरोसेंट सिग्नल, यानी प्रवर्धन वक्र के रूप में प्रस्तुत की जाती है।पीसीआर के प्रारंभिक चरण में, प्रवर्धन आदर्श परिस्थितियों में होता है, चक्रों की संख्या छोटी होती है, उत्पाद संचय छोटा होता है, और प्रतिदीप्ति के स्तर को प्रतिदीप्ति पृष्ठभूमि से स्पष्ट रूप से अलग नहीं किया जा सकता है।उसके बाद, प्रतिदीप्ति बढ़ती है और घातीय चरण में प्रवेश करती है।पीसीआर उत्पाद की मात्रा का पता एक निश्चित बिंदु पर लगाया जा सकता है जब पीसीआर प्रतिक्रिया सिर्फ घातीय चरण में होती है, जिसका उपयोग "उत्पाद की एक निश्चित मात्रा" के रूप में किया जा सकता है, और टेम्पलेट की प्रारंभिक सामग्री इससे निकाली जा सकती है।इसलिए, उत्पाद की एक निश्चित मात्रा के अनुरूप प्रतिदीप्ति संकेत तीव्रता प्रतिदीप्ति सीमा है।

पीसीआर के अंतिम चरण में, प्रवर्धन वक्र अब घातीय प्रवर्धन नहीं दिखाता है, और रैखिक चरण और पठार चरण में प्रवेश करता है।

3. सीटी मानों की पुनरुत्पादकता
जब पीसीआर चक्र सीटी मान की चक्र संख्या तक पहुंचता है, तो यह वास्तविक घातीय प्रवर्धन अवधि में प्रवेश कर चुका होता है।इस समय, छोटी त्रुटि को प्रवर्धित नहीं किया गया है, इसलिए सीटी मान की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता उत्कृष्ट है, अर्थात, एक ही टेम्पलेट को अलग-अलग समय पर या एक ही समय में अलग-अलग ट्यूबों में प्रवर्धित किया जाता है।प्रवर्धन, प्राप्त Ct मान स्थिर है।

1.प्रवर्धन दक्षता एन
पीसीआर प्रवर्धन दक्षता उस दक्षता को संदर्भित करती है जिसके साथ पोलीमरेज़ जीन को प्रवर्धित करने के लिए एम्प्लिकॉन में परिवर्तित करता है।जब एक डीएनए अणु दो डीएनए अणुओं में परिवर्तित होता है तो प्रवर्धन दक्षता 100% होती है।प्रवर्धन दक्षता को आमतौर पर En के रूप में व्यक्त किया जाता है।बाद के लेखों के विश्लेषण को सुविधाजनक बनाने के लिए, प्रवर्धन दक्षता को प्रभावित करने वाले कारकों को संक्षेप में प्रस्तुत किया गया है।

2.सीटी मानों की रेंज
सीटी मान 15-35 के बीच होता है।यदि सीटी मान 15 से कम है, तो यह माना जाता है कि प्रवर्धन आधारभूत अवधि की सीमा के भीतर है और प्रतिदीप्ति सीमा तक नहीं पहुंचा गया है।आदर्श रूप से, सीटी मान और टेम्पलेट की प्रारंभिक प्रतिलिपि संख्या के लघुगणक, यानी मानक वक्र के बीच एक रैखिक संबंध होता है।मानक वक्र के माध्यम से, जब प्रवर्धन दक्षता 100% होती है, तो जीन की एकल प्रतिलिपि संख्या को मापने के लिए गणना की गई सीटी मान 35 के आसपास होती है। यदि यह 35 से अधिक है, तो टेम्पलेट की प्रारंभिक प्रतिलिपि संख्या सैद्धांतिक रूप से 1 से कम है, जिसे अर्थहीन माना जा सकता है।

विभिन्न जीन सीटी श्रेणियों के लिए, प्रारंभिक टेम्पलेट राशि में जीन प्रतिलिपि संख्या और प्रवर्धन दक्षता में अंतर के कारण, जीन के लिए एक मानक वक्र बनाना और जीन की रैखिक पहचान सीमा की गणना करना आवश्यक है।

3.सीटी मान को प्रभावित करने वाले कारक
प्रवर्धन चक्रों की संख्या और उत्पाद की मात्रा के बीच संबंध से: प्रवर्धित उत्पाद की मात्रा = प्रारंभिक टेम्पलेट की मात्रा × (1+एन) चक्र संख्या, यह देखा जा सकता है कि आदर्श परिस्थितियों में, प्रारंभिक टेम्पलेट और एन की मात्रा सीटी मान पर नकारात्मक प्रभाव डालेगी।टेम्प्लेट गुणवत्ता या प्रवर्धन दक्षता में अंतर के कारण सीटी मान बहुत बड़ा या बहुत छोटा हो जाएगा।

4.सीटी मान बहुत बड़ा या बहुत छोटा है