आप कितना जानते हैं

एन के बारे मेंयूक्लिक एसिड निष्कर्षण

शुद्ध न्यूक्लिक एसिड की शुरुआत और अंत

शुरुआत में सब कुछ कठिन होता है, शुद्ध न्यूक्लिक एसिड सबसे कठिन होता है

आगामी प्रयोगों के लिए आणविक प्रयोगों की शुरूआत

सफलता या विफलता का महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है।

ट्रेस/अल्ट्रा-ट्रेस यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर कई वैज्ञानिक शोधकर्ताओं द्वारा पसंद किया जाता है क्योंकि यह न्यूक्लिक एसिड एकाग्रता और प्रोटीन और नमक आयन अवशेषों का आसानी से, जल्दी और आर्थिक रूप से पता लगा सकता है।

जैसा कि हम सभी जानते हैं, A260 का अर्थ है न्यूक्लिक एसिड अवशोषक OD मान, A280 का अर्थ है प्रोटीन सांद्रण अवशोषक OD मान, A230 का अर्थ है नमक आयन सांद्रण अवशोषक OD मान, इसलिए A260 न्यूक्लिक एसिड सांद्रण को परिवर्तित कर सकता है, A260/280 का अर्थ है प्रोटीन अवशेष, A260/230 का अर्थ है नमक आयन अवशेष, लेकिन यह केवल बड़ी संख्या में माप परिणामों के आधार पर शोधकर्ताओं द्वारा खोजा गया एक नियम है, और यह है "पारंपरिकयह विश्वास करने के लिए कि यह डीएनए और आरएनए की शुद्धता को समझा सकता हैएक निश्चित सीमा.यह न्यूक्लिक एसिड उपज और शुद्धता की पहचान के लिए एकमात्र मानक नहीं है, इसका उपयोग केवल एक संदर्भ के रूप में किया जाता है, और यह "स्वर्ण मानक" नहीं है।

थर्मो फिशर एनडी-2000 मैनुअल परीक्षण परिणामों की विश्वसनीयता पर जोर देता है

इसका कारण यह है कि माइक्रो/अल्ट्रामाइक्रो यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके प्राप्त परिणाम केवल पक्ष से न्यूक्लिक एसिड की उपज और शुद्धता को दर्शाते हैं, और कई प्रभावशाली कारक हैं (ऑप्टिकल पथ, नमूना मात्रा, नमूना एकाग्रता, पीएच मान, अन्य आयन जो अवशोषण माप को प्रभावित करते हैं, आदि), मापा गया ओडी मान आवश्यक रूप से सटीक नहीं है।साथ ही, अवशोषण मूल्य निर्धारण सामग्री की विशिष्टता की कमी के कारण, एकल-स्ट्रैंडेड डीएनए, डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए, आरएनए, डीएनटीपी और कुछ प्रोटीनों में 260 एनएम तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण शिखर होते हैं, और अकेले ए 260 द्वारा निर्धारित एकाग्रता जरूरी नहीं कि वास्तविक डीएनए या आरएनए हो।एकाग्रता और उसकी अखंडता और गिरावट का आकलन नहीं किया जा सकता।

तो हमारे शुद्ध न्यूक्लिक एसिड की गुणवत्ता का आकलन कैसे करें?पता लगाने के लिए माइक्रो/अल्ट्रामाइक्रो यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करने के अलावा, न्यूक्लिक एसिड की शुद्धता और अखंडता को दृश्य रूप से प्रदर्शित करने और एक निश्चित सीमा तक एकाग्रता को इंगित करने के लिए एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस जैसी विधियों की भी आवश्यकता होती है।इस प्रकार, विभिन्न विधियों के पता लगाने के परिणामों से प्राप्त न्यूक्लिक एसिड उपज और शुद्धता विश्वसनीय है।

प्रायोगिक चार्ट तुलना

H1299 कोशिकाओं के जीनोमिक डीएनए को कंपनी ए के डीएनए एक्सट्रैक्शन किट का उपयोग करके निकाला गया था, और महत्वपूर्ण अशुद्धता संदूषण देखा गया, जिसके परिणामस्वरूप उच्च ओडी मान प्राप्त हुए

(ओडी माप मूल्य और संबंधित इलेक्ट्रोफेरोग्राम)

मूल्यांकन सूचकांक

क्या न्यूक्लिक एसिड उपज और गुणवत्ता परीक्षण के लिए कोई "स्वर्ण मानक" है?

जहाँ तक हम जानते हैं, कोई सरल, तेज़ और सस्ता तरीका नहीं है।चाहे वह स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस, या मास स्पेक्ट्रोमेट्री हो, वे सभी अलग-अलग पहलुओं से समाधान में न्यूक्लिक एसिड की एकाग्रता और शुद्धता को प्रतिबिंबित करते हैं, और उन्हें एक-दूसरे का संदर्भ देकर न्याय करने की आवश्यकता होती है।

सबसे अच्छा मूल्यांकन सूचकांक हमेशा होता हैअनुवर्ती प्रायोगिक अनुप्रयोग.यह रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और पीसीआर प्रवर्धन की दक्षता को प्रभावित नहीं करता है।विश्वसनीय प्रवर्धन उत्पाद और सीटी मान प्राप्त करना, और अनुक्रमण द्वारा पूर्ण अनुक्रम प्राप्त करना सफल न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण है।

संक्षेप में, अनुपात-मात्र सिद्धांत के दृष्टिकोण को "अच्छे डाउनस्ट्रीम प्रयोगात्मक परिणामों को अच्छे निष्कर्षण मापदंडों के रूप में उपयोग करने" के दृष्टिकोण से चुनौती दी जानी चाहिए!

उच्च डीएनए/आरएनए शुद्धता प्राप्त करने के लिए अनुशंसित फोरजीन डीएनए आरएनए निष्कर्षण किट:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/