हाल ही में, मुझे कुछ अद्भुत पता चला!उनके आस-पास के कई उन्नत प्रयोग पेशेवर कुछ बहुत ही बुनियादी प्रयोगात्मक ज्ञान बिंदुओं को भी नहीं जानते हैं।

उदाहरण के लिए, क्या आप निम्नलिखित प्रश्नों का उत्तर दे सकते हैं?

क्या OD260 और A260 में कोई अंतर है?प्रत्येक का क्या मतलब है?
OD ऑप्टिकल डेंसिटी (ऑप्टिकल घनत्व) का संक्षिप्त रूप है, A अवशोषक (अवशोषण) का संक्षिप्त रूप है, दोनों अवधारणाएं वास्तव में एक ही हैं, "ऑप्टिकल घनत्व" "अवशोषण" है, लेकिन "ऑप्टिकल घनत्व" अधिकांश राष्ट्रीय मानकों के अनुरूप है और अधिक मानकीकृत है।

आमतौर पर हम न्यूक्लिक एसिड सांद्रता की गणना करने के लिए OD मान को 260nm पर मापते हैं, तो 1OD क्या दर्शाता है?
न्यूक्लिक एसिड का अधिकतम अवशोषण शिखर 260 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर होता है, जिसमें डीएनए और आरएनए दोनों होते हैं, साथ ही खंडित न्यूक्लिक एसिड टुकड़े भी होते हैं (यह मुख्य बिंदु है)।
260 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर मापा गया OD मान OD260 के रूप में दर्ज किया गया था।यदि नमूना शुद्ध है, तो OD260 मान न्यूक्लिक एसिड नमूने की सांद्रता की गणना कर सकता है।
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए)
=37 μg/एमएल एसएसडीएनए (एकल-फंसे डीएनए)
=40 माइक्रोग्राम/एमएल आरएनए
=30 μg/ml dNTPs (ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स)
क्या आरटी-पीसीआर, रीयलटाइम-पीसीआर और क्यूपीसीआर के बीच कोई संबंध और अंतर है?
आरटी-पीसीआर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर का संक्षिप्त रूप है
वास्तविक समय पीसीआर = क्यूपीसीआर, मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर के लिए संक्षिप्त
हालाँकि रियल टाइम पीसीआर (वास्तविक समय फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर) और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर (रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर) दोनों को आरटी-पीसीआर के रूप में संक्षिप्त किया गया लगता है।लेकिन अंतर्राष्ट्रीय सम्मेलन यह है: आरटी-पीसीआर विशेष रूप से रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर को संदर्भित करता है।

जीव विज्ञान में डीएनए/आरएनए की लंबाई का वर्णन करने के लिए आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले एनटी, बीपी और केबी क्या हैं?
एनटी = न्यूक्लियोटाइड
बीपी = बेस पेयर बेस पेयर
केबी = किलोबेस

निःसंदेह, आप कहेंगे कि बहुत से लोग इन छोटी-छोटी बातों की परवाह नहीं करते!हर कोई ऐसा करता है, और कोई भी आपसे नहीं पूछेगा कि यह क्या है।आप जानते हैं कि यह अनावश्यक है, है ना?

नहीं, नहीं, नहीं, ये जानना बहुत जरूरी है!जिस वजह से?
क्योंकि आप एक लेख पोस्ट करना चाहते हैं!भाई!चाहे आप स्नातक स्तर की पढ़ाई का लक्ष्य बना रहे हों या वैज्ञानिक अनुसंधान उपलब्धियों का पीछा कर रहे हों, आपको बोलने के लिए लेखों पर निर्भर रहना चाहिए!

न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण सबसे सरल और सबसे बुनियादी प्रयोग होना चाहिए।न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण की गुणवत्ता सीधे बाद के प्रयोगों के परिणामों को निर्धारित करती है।

हालाँकि मैंने इसे कई बार कहा है, फिर भी कई दोस्त हैं जिन्हें परवाह नहीं है।इस बार मैंने लेख से बाहर निकलने का फैसला किया!

मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर प्रयोगों के प्रकाशन के लिए न्यूनतम जानकारी, जिसे एमआईक्यूई कहा जाता है, अंतरराष्ट्रीय स्तर पर लॉन्च किए गए प्रतिदीप्ति मात्रात्मक प्रयोग दिशानिर्देशों का एक सेट है, जो प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर प्रयोगों के मूल्यांकन और लेख प्रकाशित करने के लिए आवश्यक प्रयोगात्मक जानकारी के लिए न्यूनतम मानकों का प्रस्ताव करता है।प्रयोगकर्ता द्वारा प्रदान की गई प्रायोगिक स्थितियों और विश्लेषण विधियों के माध्यम से, समीक्षक शोधकर्ता की प्रयोगात्मक योजना की वैधता का बेहतर मूल्यांकन कर सकते हैं।

यह देखा जा सकता है कि न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के अनुभाग में, निम्नलिखित पहचान आइटम प्रस्तावित किए गए हैं,

"ई" उस जानकारी को इंगित करता है जो प्रदान की जानी चाहिए और "डी" उस जानकारी को इंगित करता है जिसे यदि आवश्यक हो तो प्रदान किया जाना चाहिए।

फॉर्म बहुत जटिल है, दरअसल, मैं कहना चाहता हूं कि हर किसी को यहीं से शुरुआत करनी होगी

इन चार पहलुओं में न्यूक्लिक एसिड का मूल्यांकन करने के लिए शुद्धता (डी), उपज (डी), अखंडता (ई) और स्थिरता (ई)।

प्रायोगिक आदतों के अनुसार सबसे पहले बात शुद्धता और एकाग्रता की मूल्यांकन पद्धति की।

ओडी माप प्रयोगकर्ताओं के लिए पसंदीदा और सबसे आसान पता लगाने का तरीका है।जहां तक ​​सिद्धांत का सवाल है, मैं यहां विवरण में नहीं जाऊंगा।कई प्रयोगशालाएँ अब न्यूक्लिक एसिड नमूनों का सीधे मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए अल्ट्रा-माइक्रो स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करती हैं।अवशोषण मूल्य प्रदर्शित करते समय, प्रोग्राम सीधे एकाग्रता मूल्य (न्यूक्लिक एसिड, प्रोटीन और फ्लोरोसेंट डाई) और संबंधित अनुपात देता है।जहां तक ​​OD मान के विश्लेषण की बात है, इस चित्र को सहेजें और आप ठीक हो जाएंगे।

यूनिवर्सल OD मान समाधान सूची

हालाँकि, कुछ चेतावनियाँ हैं जिन्हें आपके लिए अलग से लाने की आवश्यकता है।

(आखिरकार, मैं जानता हूं कि आप ही वे लोग होंगे जो बचत करते हैं और तब तक प्रतीक्षा करते हैं जब तक आपको उनकी आवश्यकता न हो!)

नोट 1 उपकरण

OD मान विभिन्न उपकरणों से प्रभावित होगा।जब तक OD260 एक निश्चित सीमा के भीतर है, OD230 और OD280 के मान सार्थक हैं।उदाहरण के लिए, 260nm पर सामान्य Eppendorf D30 की अवशोषण सीमा 0~3A है, और थर्मो का NanoDrop One 260nm पर है।अवशोषण सीमा 0.5~62.5A है।

नोट 2तनुकरण अभिकर्मक

विभिन्न अभिकर्मकों के तनुकरण से OD मान प्रभावित हो सकता है।उदाहरण के लिए, पीएच में शुद्ध आरएनए की OD260/280 रीडिंग7.5 10एमएम ट्रिसबफ़र 1.9-2.1 के बीच है, जबकि मेंतटस्थ जलीय घोलअनुपात कम होगा, शायद केवल 1.8-2.0, लेकिन इसका मतलब यह नहीं है कि आरएनए की गुणवत्ता में अंतर बदल जाता है।

नोट 3अवशिष्ट पदार्थ

अवशिष्ट पदार्थों का अस्तित्व न्यूक्लिक एसिड एकाग्रता माप की सटीकता को प्रभावित करेगा, इसलिए जितना संभव हो सके न्यूक्लिक एसिड नमूनों में प्रोटीन, फिनोल, पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनोल अवशेषों से बचना आवश्यक है।

हालाँकि, वास्तव में, कार्बनिक अभिकर्मकों के साथ निष्कर्षण एक पुरानी विधि है।वाणिज्यिक किटों में, निष्कर्षण प्रभाव को सेंट्रीफ्यूजेशन के साथ संयुक्त सिलिका-आधारित सोखना कॉलम के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है, जिससे विषाक्त और हानिकारक कार्बनिक अभिकर्मकों से बचा जा सकता है जिन्हें निकालना मुश्किल होता है, आदि। समस्या, जैसेफोरजीन की न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण किट, पूरे ऑपरेशन के दौरान DNase/RNase और विषाक्त कार्बनिक अभिकर्मकों का उपयोग नहीं करती है, तेज़ और सुरक्षित, और यहप्रभाव हैअच्छा(संयोग से कहा गया कि यह गंजा था, लेकिन मुझे पता है आप जानना चाहते हैं)।

उदाहरण 1: जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण उपज और शुद्धता

फोरजीन मृदा डीएनए अलगाव किट (DE-05511) विभिन्न स्रोतों से मिट्टी के नमूनों का उपचार करता है, और प्राप्त जीनोमिक डीएनए की मात्रा और शुद्धता निम्नलिखित तालिका में दिखाई गई है:
उदाहरण 2: ऊतक आरएनए निष्कर्षण उपज और शुद्धता

पशु कुल आरएनए अलगाव किट (आरई-03012) ने विभिन्न ऊतक नमूनों को संसाधित किया, और प्राप्त आरएनए की मात्रा और शुद्धता नीचे दी गई तालिका में दिखाई गई है (माउस ऊतक के लिए):
हालाँकि, यह मत सोचिए कि आपका OD मान समाप्त हो गया है।क्या आपको उन मुख्य बिंदुओं पर कोई ध्यान है जो मैंने आपके लिए सामने रखे थे?

सूचना

अवशोषण में खंडित न्यूक्लिक एसिड अणुओं की भी गणना की जाएगी।यह मानते हुए कि आपके आरएनए में जीनोमिक डीएनए अवशेष हैं, आपका ओडी मूल्य बहुत अधिक प्रतीत होगा, लेकिन आरएनए की वास्तविक सांद्रता निर्धारित नहीं की जा सकती है।यह स्पष्ट नहीं है कि आपका आरएनए क्षरण है या नहीं, इसलिए अधिक सटीक निर्णय देने के लिए हमें अभी भी एक व्यापक मूल्यांकन पद्धति की आवश्यकता है, अर्थात, एमआईक्यूई में उल्लिखित न्यूक्लिक एसिड अखंडता मूल्यांकन।