गोंद पुनर्प्राप्ति में सुधार के लिए युक्तियाँ

1. वैद्युतकणसंचलन के दौरान नमूना भार बढ़ाएँ।

2. ताजा तैयार इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर का उपयोग करें।

3. गोंद काटते समय, गोंद काटने की मात्रा को कम करने के लिए केवल स्ट्रिप्स के साथ गोंद को काटने का प्रयास करें: कुछ उद्देश्य वाले टुकड़ों के साथ गोंद की आवश्यकता नहीं है, अन्यथा यह पुनर्प्राप्ति दर को प्रभावित करेगा।

4. गोंद के दो या दो से अधिक टुकड़ों को पिघलाने के बाद, एक ट्यूब का उपयोग करें, चाहे उसका आयतन कितना भी बड़ा हो और इसे उसी कॉलम में स्थानांतरित करें।

5. सोल में मिलाया गया घोल थोड़ा अधिक हो सकता है, जो डीएनए को झिल्ली से बांधने के लिए अधिक अनुकूल है, लेकिन आम तौर पर 750ul से अधिक नहीं होता है।

6. जेल रिकवरी की कुंजी कॉलम में नमक की सांद्रता, अम्लता (चार्ज) और समाधान की हाइड्रोफोबिसिटी के माध्यम से डीएनए को कॉलम से बांधना है।इसलिए, यदि इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर का पीएच बहुत अधिक है, तो सोल में 10ul (पीएच 5.0, 3मोल/एल NaAC) जोड़ा जा सकता है;झिल्ली पर डीएनए अणुओं को बेहतर ढंग से रोकने के लिए, गोंद को घोलने के बाद तरल में गर्म करने के लिए 30% आइसोप्रोपेनॉल मिलाया जा सकता है।

7. एलुएंट डालने से पहले, इथेनॉल को पूरी तरह से वाष्पित करने के लिए कॉलम को कुछ मिनट (लगभग 10 मिनट) के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दें।

8. अंत में, पुनर्प्राप्ति मात्रा को कम करने के लिए कम एलुएंट जोड़ें।आम तौर पर, 30-50μl एलुएंट का उपयोग निक्षालन के लिए किया जाता है (बहुत कम नहीं, अन्यथा यह झिल्ली को गीला करने में सक्षम नहीं होगा, जो निक्षालन के लिए अनुकूल नहीं है);झिल्ली से बंधे डीएनए को पूरी तरह से खत्म करने के लिए, निक्षालन की बूंदें झिल्ली के केंद्र में होती हैं।

9. एलुएंट जोड़ने के बाद, इसे 5 मिनट के लिए 55 डिग्री के पानी के स्नान में निक्षालित किया जा सकता है या 10 मिनट से अधिक समय के लिए 50 डिग्री के पानी के स्नान में रखा जा सकता है, या रात भर 4 डिग्री पर पैराफिल्म के साथ सील किया जा सकता है, और फिर अगले दिन पुनर्प्राप्ति के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जा सकता है, प्रभाव अच्छा है।

10. सेंट्रीफ्यूज्ड एलुएट को वापस सोखना कॉलम में जोड़ें और फिर से सेंट्रीफ्यूज करें।

पीसीआर उत्पाद पुनर्प्राप्ति के लिए विस्तृत तरीके और प्रक्रियाएं

1. साधारण रबर रीसाइक्लिंग

यदि आप गोंद को पुनः प्राप्त करना चाहते हैं, तो एक किट का उपयोग करना सबसे अच्छा है, जो सुविधाजनक है और इसकी पुनर्प्राप्ति दर थोड़ी अधिक है।यदि आपको वास्तव में इसे मैन्युअल रूप से पुनर्प्राप्त करने की आवश्यकता है, तो आप गोंद काटने के बाद टीई की 3 गुना मात्रा जोड़ सकते हैं।पानी के स्नान में पिघलने के बाद, फिनोल, फिनोल/क्लोरोफॉर्म को साफ तरीके से निकाला जाता है, और इथेनॉल को अवक्षेपित किया जाता है।इतना ही।

2. कम गलनांक वाले जैल से डीएनए पुनर्प्राप्ति

डीएनए टुकड़ों का शुद्धिकरण जेल की मात्रा के बराबर TE (10 mmol/l ट्रिस-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) मिलाएं, और जेल को पूरी तरह से घोलने के लिए 5 मिनट के लिए 65°C पानी के स्नान में रखें।

इसे कमरे के तापमान पर लाने के बाद, समान मात्रा में फिनोल (टीई से संतृप्त, टीई को ऊपरी परत में सील कर दिया गया था, और फिनोल की निचली परत को हटा दिया गया था) जोड़ा गया था, और मिश्रण को धीरे से मिलाया गया था (मिश्रण की आवश्यकता नहीं थी), और 3 मिनट के लिए 12,000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था।1-2 बार दोहराएँ.

सतह पर तैरनेवाला लें, इथेनॉल अवक्षेपण के लिए 3mol/L सोडियम एसीटेट (pH 5.2) की 0.1 मात्रा और पूर्ण इथेनॉल की 2.5 गुना मात्रा जोड़ें।शुद्ध डीएनए को उचित मात्रा में टीई के साथ घोलें, सामग्री को मापें और उपयोग के लिए तैयार करें (इसका उपयोग लक्ष्य जीन संरचना विश्लेषण, जांच तैयारी आदि के लिए किया जा सकता है)।

3. अच्छी प्रवर्धन विशिष्टता के साथ पीसीआर रिकवरी

यदि पीसीआर प्रवर्धन की विशिष्टता अच्छी है, तो यह पीसीआर उत्पाद का एक सरल शुद्धिकरण और पुनर्प्राप्ति मात्र है।आप पीसीआर उत्पाद में 50 यूजी/एमएल प्रोटीनेज़ के जोड़ सकते हैं, 1 घंटे के लिए 37 डिग्री, फिनोल/क्लोरोफॉर्म के साथ एक बार निकालें, क्लोरोफॉर्म के साथ एक बार निकालें, और सतह पर तैरनेवाला की 0.1 मात्रा जोड़ें।सोडियम एसीटेट को 2.5 मात्रा के पूर्ण इथेनॉल के साथ वर्षा द्वारा पुनर्प्राप्त किया गया था।

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