RNase एक संवेदनशील शब्द है जिसे कई छात्र जो अक्सर RNA निष्कर्षण प्रयोग करते हैं, सुनना नहीं चाहते हैं।पूरी तरह से सशस्त्र, आरएनए जिसे अंततः अत्यधिक जहरीले अभिकर्मकों फिनोल और क्लोरोफॉर्म के साथ निकाला गया था, नष्ट हो गया था।मैं मेल-मिलाप नहीं कर रहा हूँ!!!आइए आज प्रसिद्ध Rnase की उत्पत्ति पर एक नज़र डालें।

राइबोन्यूक्लिज़ (RNase), या RNase, एक न्यूक्लिज़ है जो RNA को छोटे अणुओं में हाइड्रोलाइज़ कर सकता है।RNase, एक छोटे अणु प्रोटीन के रूप में, असामान्य रूप से स्थिर है .पारंपरिक उच्च तापमान और उच्च दबाव भाप नसबंदी और प्रोटीन अवरोधक इसे पूरी तरह से निष्क्रिय नहीं कर सकते हैं।RNase की स्थिरता मुख्य रूप से संरचना में डाइसल्फ़ाइड बांड से आती है।उदाहरण के लिए, गोजातीय अग्न्याशय के आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले RNase में केवल 124 अमीनो एसिड होते हैं, लेकिन इसमें 4 डाइसल्फ़ाइड बांड होते हैं।सल्फर बॉन्ड और डाइसल्फ़ाइड बॉन्ड RNase को उत्कृष्ट तापीय स्थिरता प्रदान करते हैं।इसके अलावा, rnase का आणविक भार अपेक्षाकृत छोटा होता है और यह कई मामलों में अपनी मूल संरचना को जल्दी से बहाल कर सकता है।

अत्यधिक स्थिर होने के अलावा,RNases प्रयोगशाला में सर्वव्यापी हैं .RNase एक जैविक रक्षा तंत्र है।किसी कोशिका के लिए, बहिर्जात आरएनए अक्सर घातक होता है।बहिर्जात डीएनए की तुलना में, बहिर्जात आरएनए अक्सर अधिक खतरनाक होता है।आरएनए को ख़ुशी-ख़ुशी प्रतिलेखित और अनुवादित किया जाता है, इसलिए लगभग सभी जीवों ने बहिर्जात आरएनए के आक्रमण से बचाव के लिए आरएनएज़ विकसित किया है।इसलिए, प्रयोगशाला में संवर्धित जीवाणु कोशिकाएं और आप जो आरएनए निकालते हैं, आरएनएएस की सुगंध निकालते हैं।मानव शरीर के तरल पदार्थ (लार, आँसू, आदि) में बड़ी मात्रा में RNase होता है, इसलिए RNA के ख़राब होने पर रोएँ नहीं।जितना अधिक आप रोएंगे, आरएनए का क्षरण उतना ही बुरा होगा!!बहन दाइयू आरएनए निष्कर्षण के लिए उपयुक्त नहीं है!

इसके अलावा, आपकी नाजुक त्वचा में भी बहुत सारा RNase होता है, और मार्कर, पिपेट, रेफ्रिजरेटर के दरवाजे और दरवाज़े के हैंडल जिन्हें त्वचा ने छुआ है, उनमें भी RNase होता है।

इतनी अधिक बकवास के साथ, आइए देखें कि आरएनएसेस से कैसे निपटें।

आरएनए को हटाते समय हर कोई पहली बात जो सोचता है वह हैडीईपीसी(डायथाइल पाइरोकार्बोनेट)।DEPC मुख्य रूप से RNase सक्रिय समूह हिस्टिडीन के इमिडाज़ोल रिंग के साथ संयोजन करके प्रोटीन को विकृत करता है, जिससे एंजाइम की गतिविधि बाधित होती है।0.1% DEPC का Rnase पर बेहतर निष्कासन प्रभाव हो सकता है, लेकिन हमें ध्यान देने की आवश्यकता है कि DEPC एक ज्ञात कैंसरजन है, इसलिए इसका उपयोग करते समय विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए।

RNase के लिए, हमें दो पहलुओं से शुरुआत करनी होगी,पहला अंतर्जात RNase की गतिविधि को रोकना है

ट्राइज़ोल में मौजूद गुआनिडीन आइसोथियोसाइनेट और डीटीटी जैसे पारंपरिक आरएनए निष्कर्षण अभिकर्मक आरएनएज़ के डाइसल्फ़ाइड बंधन को खोल सकते हैं, लेकिन अभी भी कुछ आरएनएज़ हैं, खासकर ऊतक नमूनों में, इसलिए कम तापमान पर ध्यान दें।

1.ऊतक के नमूने को बाहर निकालने के तुरंत बाद उसे तरल नाइट्रोजन में या किसी वाणिज्यिक आरएनए संरक्षण समाधान में डुबो दें।

2.कोशिका नमूने का आरएनए निकालने के बाद, इसे लाइसिस समाधान में जोड़ें और इसे आइस बॉक्स पर लाइज़ करें

3. पीसने के लिए तरल नाइट्रोजन का उपयोग करना सबसे अच्छा है जब ऊतक के नमूनों को समरूप बनाया जाता है।तरल नाइट्रोजन के बिना इलेक्ट्रिक होमोजेनाइज़र का उपयोग करते समय, होमोजेनेट एडॉप्टर को पूरी तरह से प्री-कूल करने पर ध्यान दें।

दूसरा बहिर्जात DNase है

1.पूरी तरह से सशस्त्र रहें, एक लैब कोट पहनें, एक मुखौटा पहनें, और नए दस्ताने की एक जोड़ी पहनना सुनिश्चित करें (इतना मितव्ययी मत बनो !! यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि ट्राइज़ोल सुपर संक्षारक है, और यह दस्ताने के माध्यम से भी बहुत मजबूत है, इसलिए अपने हाथों पर न टपकें)।

2.उपयोग किए गए सभी पिपेट टिप्स, ईपी ट्यूब, पीसीआर ट्यूब और अन्य उपकरणों को डी-आरनेज़ उपचारित किया जाना चाहिए।इसे 0.1% डीईपीसी में भिगोया जा सकता है और फिर उच्च दबाव में दबाया जा सकता है।धूआं हुड में ऑपरेशन पर ध्यान दें।स्थानीय तानाशाह एंजाइमों को हटाने के लिए सीधे उपभोग्य वस्तुएं खरीद सकते हैं।

पुनश्च: मैं आपको एक आलसी तरीका बताता हूँ।हालाँकि उच्च तापमान और उच्च दबाव RNase को पूरी तरह से नहीं हटा सकते हैं, लेकिन यह इसका एक बड़ा हिस्सा हटा देंगे।2 गुना उच्च तापमान और उच्च दबाव का अच्छा प्रभाव पड़ता है, और आरएनए के निष्कर्षण पर बहुत कम प्रभाव पड़ता है।

3.शराब प्रोटीन को विकृत कर सकती है,इसलिए आरएनए निष्कर्षण तालिका को 75% अल्कोहल से पोंछा जा सकता है , और दस्तानों पर अल्कोहल का छिड़काव भी किया जा सकता है।

4.अंतिम आरएनए घुलनशील समाधान और सेंट्रीफ्यूज ट्यूब को भी डी-आरएनएएस उपचारित किया जाना चाहिए।डीईपीसी पानी आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला आरएनए घोलने वाला घोल है।आइए डीईपीसी पानी की सही तैयारी विधि के बारे में बात करें (जब आप वाणिज्यिक डीईपीसी खरीदें तो उसे दोबारा पैक करना याद रखें)

1:1000 पर अल्ट्राप्योर पानी में डीईपीसी मिलाएं, अच्छी तरह से हिलाएं, रात भर 37 डिग्री सेल्सियस पर छोड़ दें, और 15 मिनट के लिए उच्च तापमान और उच्च दबाव के तहत 121 डिग्री सेल्सियस पर स्टरलाइज़ करें।DEPC पानी को 1ml एलिकोट्स में -20°C पर संग्रहित किया जा सकता है।

अंत में, संक्षेप में कहें तो: कम तापमान ही कुंजी है, उपभोग्य सामग्रियों को अच्छी तरह से संभाला जाता है, पूरी तरह से सशस्त्र और कम बातचीत!

खैर, आज की रणनीति के लिए बस इतना ही।मैं आपके द्वारा बताई गई सभी आरएनए सांद्रता और शुद्धता की कामना करता हूं।A260/A280 दोनों 2.0 हैं!!!

निःसंदेह, यदि आप a. का उपयोग करते हैंकमरे के तापमान ऑपरेशन आरएनए निष्कर्षण किट, आपको उपरोक्त परेशानियों का सामना नहीं करना पड़ेगा।

कमरे के तापमान पर ऑपरेशन, DNase को जोड़े बिना, 11 मिनट में कोशिकाओं से कुल आरएनए निकालता है, और 30 मिनट में जानवरों के ऊतकों या पौधों से कुल आरएनए निकालता है।

परीक्षण नमूनों के लिए कृपया संपर्क करें:overseas@foregene.com

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