पशु कुल आरएनए अलगाव किट पशु ऊतकों और कोशिका के लिए कुल आरएनए निष्कर्षण और शुद्धिकरण किट
किट विवरण:
विभिन्न जानवरों के ऊतकों से उच्च शुद्धता और उच्च गुणवत्ता वाले कुल आरएनए को जल्दी और कुशलता से निकालें।
आरएनए क्षरण के बारे में चिंता करने की कोई जरूरत नहीं है।पूरा सिस्टम RNase-मुक्त है
डीएनए-क्लीनिंग कॉलम का उपयोग करके डीएनए को प्रभावी ढंग से हटाएं
DNase को जोड़े बिना DNA हटाएँ
सरल - सभी ऑपरेशन कमरे के तापमान पर पूरे किए जाते हैं
तेज़-ऑपरेशन 30 मिनट में पूरा किया जा सकता है
सुरक्षित-किसी भी जैविक अभिकर्मक का उपयोग नहीं किया गया
उच्च शुद्धता—OD260/280≈1.8-2.1
किट विवरण
50 तैयारी, 200 तैयारी
यह किट इसका उपयोग करती हैस्पिन कॉलम और सूत्रहमारी कंपनी द्वारा विकसित, जो उच्च दक्षता के साथ विभिन्न जानवरों के ऊतकों से उच्च शुद्धता और उच्च गुणवत्ता वाले कुल आरएनए को निकाल सकता है। यह एक कुशल डीएनए-क्लीनिंग कॉलम प्रदान करता है, जो सतह पर तैरनेवाला और ऊतक लाइसेट से जीनोमिक डीएनए को आसानी से अलग और सोख सकता है, सरल और समय बचाने वाला;आरएनए-केवल कॉलम आरएनए को कुशलता से बांध सकता है और एक अद्वितीय सूत्र के साथ बहुत सारे नमूनों को एक साथ संसाधित किया जा सकता है।
पूरा सिस्टम RNase-मुक्त है, ताकि निकाला गया RNA ख़राब न हो;बफर आरडब्ल्यू1, बफर आरडब्ल्यू2 बफर वाशिंग सिस्टम, ताकि प्राप्त आरएनए प्रोटीन, डीएनए, आयन और कार्बनिक यौगिक प्रदूषण से मुक्त हो।
किट घटक
| पशु कुल आरएनए अलगाव किट | ||
| किट घटक | आरई-03011 | आरई-03014 |
| 50 टी | 200 टी | |
| बफ़र RL1* | 25 मि.ली | 100 मिलीलीटर |
| बफ़र RL2 | 15 मि.ली | 60 मि.ली |
| बफर RW1* | 25 मि.ली | 100 मिलीलीटर |
| बफर RW2 | 24 मि.ली | 96 मि.ली |
| RNase-मुक्त ddH2O | 10 मि.ली | 40 मिलीलीटर |
| केवल आरएनए कॉलम | 50 | 200 |
| डीएनए-सफाई कॉलम | 50 | 200 |
| अनुदेश पुस्तिका | 1 टुकड़ा | 1 टुकड़ा |
उत्पाद की जानकारी
| प्रारूप | स्पिन कॉलम | शुद्धिकरण घटक | फोरजीन कॉलम, अभिकर्मक |
| फ्लक्स | 1-24 नमूने | प्रति तैयारी समय | ~30 मिनट (24 नमूने) |
| अपकेंद्रित्र | डेस्क सेंट्रीफ्यूज | पायरोलिसिस पृथक्करण | केन्द्रापसारक पृथक्करण |
| नमूना | पशु ऊतक;कक्ष | नमूनों की मात्रा | ऊतक: 10-20 मिलीग्राम;सेल:(1-5)×106 |
| निक्षालन मात्रा | 50-200 μL | अधिकतम लोडिंग मात्रा | 850 μL |
विशेषताएँ एवं लाभ
■ आरएनए क्षरण के बारे में चिंता करने की कोई ज़रूरत नहीं है;संपूर्ण सिस्टम RNase-मुक्त है
■ डीएनए-क्लीनिंग कॉलम का उपयोग करके डीएनए को प्रभावी ढंग से हटाएं
■ DNase जोड़े बिना DNA हटाएँ
■ सरल-सभी ऑपरेशन कमरे के तापमान पर पूरे किए जाते हैं
■ फास्ट-ऑपरेशन 30 मिनट में पूरा किया जा सकता है
■ सुरक्षित-किसी जैविक अभिकर्मक की आवश्यकता नहीं
■ उच्च शुद्धता -OD260/280≈1.8-2.1
किट आवेदन
यह विभिन्न प्रकार के ताजे या जमे हुए पशु ऊतकों या संवर्धित कोशिकाओं से कुल आरएनए के निष्कर्षण और शुद्धिकरण के लिए उपयुक्त है।
उत्पाद पैरामीटर
■ डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोग: प्रथम-स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण, आरटी-पीसीआर, आणविक क्लोनिंग, नॉर्दर्न ब्लॉट, आदि।
■ नमूने: पशु ऊतक, सुसंस्कृत कोशिकाएँ
■ खुराक: ऊतक 10-20 मिलीग्राम, कोशिकाएं(2-5)×106
■ शुद्धिकरण स्तंभ की अधिकतम डीएनए बाइंडिंग क्षमता: 80 μg
■ निक्षालन मात्रा: 50-200 μl
आरेख
पशु कुल आरएनए आइसोलेशन किट से उपचारित 20 मिलीग्राम
ताजा चूहे के नमूने, 5% शुद्ध कुल आरएनए 1% एगर लें
ग्लाइकोजेल वैद्युतकणसंचलन
1: प्लीहा 2: गुर्दा
3: लीवर 4: हृदय
भंडारण और शेल्फ जीवन
किट को कमरे के तापमान (15-25 ℃) पर 24 महीने या 2-8 ℃ पर लंबे समय तक संग्रहीत किया जा सकता है।बफ़र RL1 को β-मर्कैप्टोएथेनॉल (वैकल्पिक) जोड़ने के बाद 1 महीने के लिए 4 ℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है।
उद्धृत लेख
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आरएनए आइसोलशन किट के लिए अन्य नमूना स्रोतउपलब्ध हैं:
कोशिका, पौधा, विषाणु, रक्त, आदि।
आरएनए निकाला नहीं जाता है या आरएनए की पैदावार कम होती है
अक्सर विभिन्न प्रकार के कारक होते हैं जो पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करते हैं, जैसे: ऊतक नमूना आरएनए सामग्री, संचालन की विधि, निक्षालन मात्रा, आदि।
1. ऑपरेशन के दौरान आइस बाथ या क्रायोजेनिक (4 डिग्री सेल्सियस) सेंट्रीफ्यूजेशन किया गया।
सिफ़ारिश: पूरी प्रक्रिया के दौरान कमरे के तापमान (15-25 डिग्री सेल्सियस) पर काम करें, बर्फ से स्नान न करें और कम तापमान पर सेंट्रीफ्यूज न करें।
2. अनुचित नमूना संरक्षण या अत्यधिक नमूना भंडारण समय।
सिफ़ारिश: नमूनों को -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें या तरल नाइट्रोजन में फ्रीज करें और बार-बार फ्रीज-पिघलने के उपयोग से बचें;आरएनए निष्कर्षण के लिए ताजा ऊतक या सुसंस्कृत कोशिकाओं का उपयोग करने का प्रयास करें।
3. अपर्याप्त नमूना विश्लेषण।
सिफ़ारिश: ऊतक को समरूप बनाते समय, सुनिश्चित करें कि ऊतक पर्याप्त रूप से समरूप है और ऊतक कोशिकाएं आरएनए की रिहाई को समझाने के लिए पर्याप्त रूप से विभाजित हैं।
4. एलुएंट सही ढंग से नहीं डाला गया है।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि RNase-मुक्त ddH2शुद्धिकरण स्तंभ झिल्ली के मध्य में O को बूंद-बूंद करके जोड़ा जाता है।
5. बफ़र RL2 या बफ़र RW2 में पूर्ण इथेनॉल की सही मात्रा नहीं जोड़ी गई थी।
सिफ़ारिश: निर्देशों का पालन करें, बफ़र आरएल2 और बफ़र आरडब्ल्यू2 में पूर्ण इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ें और किट का उपयोग करने से पहले अच्छी तरह मिलाएं।
6. ऊतक के नमूने की खुराक उचित नहीं है।
सिफ़ारिश: 10-20 मिलीग्राम ऊतक या (1-5) × 10 का उपयोग करें6प्रति 500 μl बफर आरएल1 कोशिकाएं, क्योंकि अत्यधिक ऊतक उपयोग के परिणामस्वरूप आरएनए निष्कर्षण कम हो सकता है।
7. अनुचित निक्षालन मात्रा या अपूर्ण निक्षालन।
सिफ़ारिश: शुद्धि स्तंभ की निक्षालन मात्रा 50-200 μl है;यदि निक्षालन प्रभाव संतोषजनक नहीं है, तो पहले से गरम RNase-मुक्त ddH जोड़ने के बाद कमरे के तापमान प्लेसमेंट समय को बढ़ाने की सिफारिश की जाती है2ओ, उदाहरण के लिए 5-10 मिनट के लिए।
8.बफ़र RW2 धोने के बाद शुद्धिकरण स्तंभ में इथेनॉल अवशेष होता है।
सिफ़ारिश: यदि बफर आरडब्ल्यू2 धोने के बाद इथेनॉल अवशेष है, तो 1 मिनट के लिए खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन करें, खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन ऑपरेशन का समय 2 मिनट तक बढ़ाया जा सकता है, या अवशिष्ट इथेनॉल को पर्याप्त रूप से हटाने के लिए शुद्धिकरण कॉलम को 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर रखा जा सकता है।
शुद्ध आरएनए का क्षरण होता है
शुद्ध आरएनए की गुणवत्ता नमूने के संरक्षण, आरएनएएस संदूषण और हेरफेर आदि जैसे कारकों से संबंधित है।
1. ऊतक के नमूने समय पर नहीं रखे जाते।
सिफ़ारिश: यदि संग्रह के बाद ऊतक के नमूनों या कोशिकाओं का समय पर उपयोग नहीं किया जाता है, तो तुरंत -80 डिग्री सेल्सियस या तरल नाइट्रोजन पर क्रायोप्रिजर्व करें।आरएनए निकालने के लिए, जब भी संभव हो नए लिए गए ऊतक या कोशिका के नमूने का उपयोग करें।
2. ऊतक के नमूनों का बार-बार जमना-पिघलना।
सिफ़ारिश: ऊतक के नमूनों को संग्रहीत करते समय, संरक्षण के लिए उन्हें छोटे टुकड़ों में काटना सबसे अच्छा है, और नमूने के बार-बार जमने-पिघलने और आरएनए के क्षरण से बचने के लिए उनका उपयोग करते समय एक टुकड़े को हटा दें।
3. ऑपरेशन के दौरान RNase पेश किया गया है या डिस्पोजेबल दस्ताने, मास्क आदि नहीं पहने हुए हैं।
सिफ़ारिश: आरएनए निष्कर्षण प्रयोगों को अलग-अलग आरएनए हेरफेर कमरों में सबसे अच्छा किया जाता है और प्रयोग से पहले तालिका को साफ़ कर दिया जाता है।
RNase की शुरूआत के कारण होने वाले RNA क्षरण को कम करने के लिए प्रयोग के दौरान डिस्पोजेबल दस्ताने और मास्क पहनें।
4. उपयोग के दौरान अभिकर्मक RNase से दूषित हो जाते हैं।
सिफ़ारिश: संबंधित प्रयोगों के लिए एक नए एनिमल टोटल आरएनए आइसोलेशन किट से बदलें।
5. आरएनए हेरफेर में उपयोग किए जाने वाले सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, टिप्स आदि आरएनएएस से दूषित होते हैं।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि आरएनए निष्कर्षण में उपयोग की जाने वाली सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, टिप्स, पिपेट आदि सभी आरएनसे-मुक्त हैं।
शुद्ध प्राप्त आरएनए डाउनस्ट्रीम प्रयोगों को प्रभावित करता है
शुद्धिकरण स्तंभ द्वारा शुद्ध किए गए आरएनए, यदि नमक आयन, प्रोटीन सामग्री बहुत बड़ी है, तो डाउनस्ट्रीम प्रयोग को प्रभावित करेगा, जैसे: रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, उत्तरी ब्लॉट एट अल।
1. निक्षालित आरएनए में नमक आयन अवशेष होते हैं।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि बफर आरडब्ल्यू2 में इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ी गई है और ऑपरेशन के लिए संकेतित केन्द्रापसारक गति पर 2 शुद्धिकरण कॉलम वॉश करें;यदि कोई नमक आयन अवशेष है, तो शुद्धिकरण कॉलम को कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए बफर आरडब्ल्यू 2 पर छोड़ दें और नमक संदूषण को अधिकतम करने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन करें।
2. निक्षालित आरएनए में इथेनॉल अवशेष।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि बफर RW2 धोने के बाद, ऑपरेशन के लिए संकेतित सेंट्रीफ्यूजेशन गति पर खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन ऑपरेशन करें, अगर अभी भी इथेनॉल अवशेष है तो खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन ऑपरेशन का समय 2 मिनट तक बढ़ाएं, या इथेनॉल अवशेषों को अधिकतम करने के लिए खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद इसे 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दें।
