(96-वेल) क्विकईज़ी सेल डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट - एसवाईबीआर ग्रीन आई
विवरण
(96-वेल) क्विकईज़ीTM सेल डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट–SYBR ग्रीन Iप्रदानएक अद्वितीय लिसीज़ बफर सिस्टमto शीघ्रता से आरएनए जारी करेंसुसंस्कृत कोशिका सेआरटी-क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए नमूने, समय लेने वाली और श्रमसाध्य को खत्म करते हैंआरएनए शुद्धिकरण प्रक्रिया, और आवश्यक आरएनए टेम्पलेट प्राप्त करने में केवल 7 मिनट लगते हैं।5× डायरेक्ट आरटी मिक्सऔर2× डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआरबॉक्स में जल्दी और आसानी से उपलब्ध कराया जा सकता हैप्रभावी ढंग से वास्तविक समय मात्रात्मक प्राप्त करेंपीसीआर परिणाम
5× डायरेक्ट आरटी मिक्स और 2× डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर में मजबूत अवरोधक सहनशीलता है, और कुशल रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और विशिष्ट प्रवर्धन के लिए टेम्पलेट के रूप में परीक्षण किए जाने वाले नमूने के लाइसेट का उपयोग कर सकते हैं।अभिकर्मक में आरएनए के लिए उच्च आत्मीयता के साथ फोरजीन अद्वितीय रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, साथ ही हॉट डी-टैक डीएनए पॉलीमरेज़, डीएनटीपी, एमजीसीएल शामिल हैं।2 , प्रतिक्रिया बफर, पीसीआर ऑप्टिमाइज़र और स्टेबलाइज़र, और नमूना को जल्दी, आसानी से और सटीक रूप से पता लगाने के लिए लिसिस बफर के साथ संयोजन में उपयोग किया जा सकता है, और इसमें उच्च संवेदनशीलता, मजबूत विशिष्टता और अच्छी स्थिरता की विशेषताएं हैं।
किट का लक्ष्य 96-अच्छी तरह से सुसंस्कृत कोशिकाओं का सूक्ष्म-प्रणाली विश्लेषण करना है, और इसमें अच्छी एकरूपता और स्थिरता है;किट घटक 96 लाइसिस प्रतिक्रियाएं, 96 रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रतिक्रियाएं और 96×2 क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाएं प्रदान करते हैं, जो एक बार के उपयोग के लिए 96-वेल सेल प्लेट को पूरा कर सकते हैं, अभिकर्मकों के बार-बार खुलने, जमने और पिघलने और अभिकर्मकों के प्रदर्शन में गिरावट के कारण होने वाले प्रदूषण से बच सकते हैं।
किट घटक
| किट रचना ( 50 μएल लाइसिस प्रणाली/20 μLRT प्रतिक्रिया प्रणाली /20μएल क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली) | डीआरटी-03011 | टिप्पणी | |
| 96टी | |||
| भागI | बफरCL | 5 एमएल | कक्षलसीका |
| फोरजीनप्रोटीज़ प्लस II | 100 μL | ||
| बफरST | 500 μL | ||
| भाग II | डीएनएरबड़ | 100 μL | |
| 5× डायरेक्ट आरटी मिक्स | 400 μL | RT | |
| 2× डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-SYBR | 1 मीL × 2 | क्यूपीसीआर | |
| 50× ROX संदर्भ डाई | 400μL | ||
| RNase- मुक्तडीडीएच2 O | 1.7 एमएल |
| |
| Mवार्षिक | 1 टुकड़ा | 1 सर्विंग | |
*: लाइसिस अभिकर्मक डीएनए इरेज़र किट के भाग II में शामिल है;सेल लिसिस, आरटी और क्यूपीसीआर घटकों को अलग से खरीदा जा सकता है।
विशेषताएँ एवं लाभ
■सरल और प्रभावी: सेल डायरेक्ट आरटी तकनीक से, आरएनए नमूने केवल 7 मिनट में प्राप्त किए जा सकते हैं।
■ नमूने की मांग छोटी है, यहां तक कि कम से कम 10 कोशिकाओं का परीक्षण किया जा सकता है।
■ उच्च थ्रूपुट: यह 384, 96, 24, 12, 6-वेल प्लेटों में संवर्धित कोशिकाओं में आरएनए का तुरंत पता लगा सकता है।
■ डीएनए इरेज़र जारी जीनोम को तुरंत हटा सकता है, बाद के प्रयोगात्मक परिणामों पर प्रभाव को काफी कम कर सकता है।
■ अनुकूलित आरटी और क्यूपीसीआर प्रणाली दो-चरणीय आरटी-पीसीआर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन को अधिक कुशल और पीसीआर को अधिक विशिष्ट बनाती है, और आरटी-क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया अवरोधकों के प्रति अधिक प्रतिरोधी बनाती है।
किट आवेदन
आवेदन का दायरा: सुसंस्कृत कोशिकाएं।
- नमूना विश्लेषण द्वारा जारी आरएनए: केवल इस किट के आरटी-क्यूपीसीआर टेम्पलेट पर लागू होता है।
- किट का उपयोग निम्नलिखित उद्देश्यों के लिए किया जा सकता है: जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, siRNA-मध्यस्थता जीन साइलेंसिंग प्रभाव का सत्यापन, दवा स्क्रीनिंग, आदि।
भंडारण और शेल्फ जीवन
इस किट का भाग I 4 पर संग्रहित किया जाना चाहिए℃;भाग II को -20℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए।
फोरजीन प्रोटीज़ प्लस II को 4 पर संग्रहित किया जाना चाहिए℃, -20℃ पर जमें नहीं।
अभिकर्मक 2×डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-टैक्मैन को -20 पर संग्रहित किया जाना चाहिए℃अंधेरे में;यदि बार-बार उपयोग किया जाए तो इसे 4 पर भी संग्रहीत किया जा सकता हैअल्पकालिक भंडारण के लिए ℃ (10 दिनों के भीतर उपयोग करें)।
रियल टाइम पीसीआर प्राइमर डिज़ाइन सिद्धांत
फॉरवर्ड प्राइमर और रिवर्स प्राइमर
रियल टाइम पीसीआर के लिए प्राइमर डिजाइन बहुत महत्वपूर्ण है।प्राइमर पीसीआर प्रवर्धन की विशिष्टता और दक्षता से संबंधित हैं, और इन्हें निम्नलिखित सिद्धांतों के संदर्भ में डिज़ाइन किया जा सकता है:
- प्राइमर की लंबाई: 18-30bp.
- जीसी सामग्री: 40-60%।
- टीएम मान: प्राइमर डिज़ाइन सॉफ़्टवेयर, जैसे प्राइमर 5, प्राइमर का टीएम मान दे सकता है।अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमरों का टीएम मान यथासंभव करीब होना चाहिए।टीएम गणना सूत्र का भी उपयोग किया जा सकता है: टीएम = 4 डिग्री सेल्सियस (जी + सी) + 2 डिग्री सेल्सियस (ए + टी)।पीसीआर निष्पादित करते समय, 5 डिग्री सेल्सियस के प्राइमर टीएम मान से नीचे का तापमान आम तौर पर एनीलिंग तापमान के रूप में चुना जाता है (एनीलिंग तापमान में इसी वृद्धि से पीसीआर प्रतिक्रिया की विशिष्टता बढ़ सकती है)।
- प्राइमर और पीसीआर उत्पाद:
- डिज़ाइन प्राइमर पीसीआर प्रवर्धन उत्पाद की लंबाई अधिमानतः 100-150bp है।
- टेम्पलेट के द्वितीयक संरचनात्मक क्षेत्र में डिज़ाइन प्राइमरों से जितना संभव हो बचा जाना चाहिए।
- अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमरों के 3′ सिरों के बीच 2 या अधिक पूरक आधारों के निर्माण से बचें।
- प्राइमर 3′ टर्मिनल बेस 3 अतिरिक्त लगातार जी या सी के साथ मौजूद नहीं हो सकता है।
- प्राइमरों में स्वयं पूरक संरचनाएं नहीं हो सकतीं, अन्यथा एक हेयरपिन संरचना बन जाएगी, जो पीसीआर प्रवर्धन को प्रभावित करेगी।
- एटीसीजी को प्राइमर अनुक्रम में यथासंभव समान रूप से वितरित किया जाना चाहिए, और 3' टर्मिनल बेस को टी के रूप में टाला जाना चाहिए।
अनुबंध1：सीया प्रत्यक्षआरटी-क्यूपीसीआर किट घटकटी अनुपूरक पैक
1.सेल लिसिस समाधान
| कोशिका विश्लेषण समाधान | |||
| किट घटक (24-कुआं लसीका प्रणाली/कुआं) | डीआरटी-01011-ए1 | डीआरटी-01011-ए2 | |
| 100 टी | 500 टी | ||
| भागमैं | बफर सीएल | 20 मि.ली | 100 मि.ली |
| फोरजीन प्रोटीज़ प्लस II | 400 μl | 1 मिली × 2 | |
| बफर एस.टी | 1 मिली × 2 | 10 मि.ली | |
| भागद्वितीय | डीएनए इरेज़र | 400 μl | 1 मिली × 2 |
| आरटी मिक्स | |
| किट घटक (20μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | डीआरटी-01011-बी1 |
| 200 टी | |
| 5× डायरेक्ट आरटी मिक्स | 800 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | 1.7 मिली × 2 |
| क्यूपीसीआर मिक्स | ||
| किट घटक (20μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01021-C1 | डीआरटी-01021-सी2 |
| 200 टी | 1000 टी | |
| 2× डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-टैक्मैन | 1 मिली × 2 | 1.7 मिली × 6 |
| 20× ROX संदर्भ डाई | 40 μl | 200 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | 1.7 मि.ली | 10 मि.ली |
निर्देश पुस्तिका:
