समस्या विश्लेषण मार्गदर्शिका

आपके सामने आने वाली समस्याओं का निम्नलिखित विश्लेषणकुल पौधाRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

स्पिन कॉलम भरा हुआ है

स्पिन कॉलम में रुकावट के कारण आरएनए उपज कम हो जाएगी या आरएनए प्राप्त करने के लिए शुद्ध होने में भी असमर्थ हो जाएगी, और प्राप्त आरएनए की गुणवत्ता कम होगी।

सामान्य कारण विश्लेषण:

1. नमूना पूरी तरह टूटा नहीं है.

अधूरा नमूना विखंडन डीएनए-सफाई कॉलम को अवरुद्ध कर सकता है, जो आरएनए उपज और गुणवत्ता को भी प्रभावित कर सकता है।हम अनुशंसा करते हैं कि नमूना विखंडन करते समय, जितना संभव हो सके नमूनों की कोशिका दीवारों और कोशिका झिल्ली जैसे ऊतकों को तोड़ने के लिए पर्याप्त मात्रा में तरल नाइट्रोजन को जल्दी से पीस लें।पॉलीफेनॉल पॉलीसेकेराइड के पौधों के नमूनों के लिए, हम अनुशंसा करते हैं कि आप प्लांट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट प्लस का उपयोग करें।

2. डीएनए-क्लीनिंग कॉलम पृथक सतह पर तैरनेवाला को एस्पिरेट करें, संभावित सेल मलबे गोली को एस्पिरेट करें।

एस्पिरेटेड सेल मलबे की गोली आरएनए सोखना प्रक्रियाओं के दौरान आरएनए-केवल कॉलम को रोक सकती है (प्रक्रिया के चरण 5, पॉलीसेकेराइड पॉलीफेनोल प्रक्रिया के चरण 6 देखें)।हम अनुशंसा करते हैं कि सेल मलबे को एस्पिरेट होने से बचाने के लिए इस सतह पर तैरनेवाला को एस्पिरेट करते समय सावधानी बरतनी चाहिए।

3. नमूने की प्रारंभिक मात्रा बहुत बड़ी है.

अत्यधिक नमूना उपयोग के परिणामस्वरूप अधूरा नमूना विखंडन या बफर पीआरएल1 या बफर पीएसएल1 द्वारा कोशिकाओं का अधूरा विश्लेषण होगा, जिसके परिणामस्वरूप शुद्धिकरण कार्यों के लिए शुद्धिकरण स्तंभ अवरुद्ध हो जाएगा।प्लांट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट में एक संचालित नमूने के प्रति एकल शुद्धिकरण की प्रारंभिक अधिकतम सीमा 50 मिलीग्राम है।पॉलीफेनॉल पॉलीसेकेराइड के पौधों के नमूनों के लिए, हम अनुशंसा करते हैं कि आप प्लांट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट प्लस आज़माएँ।

4. सेंट्रीफ्यूज का तापमान बहुत कम है.

संपूर्ण आरएनए अलगाव और शुद्धिकरण, नमूना ऊतक के तरल नाइट्रोजन व्यवधान को छोड़कर, सभी चरण कमरे के तापमान (20-25 डिग्री सेल्सियस) पर किए जाते हैं।कुछ कम तापमान वाले सेंट्रीफ्यूज का तापमान 20 डिग्री सेल्सियस से नीचे होता है, जो डीएनए-सफाई कॉलम और/या आरएनए-केवल कॉलम में रुकावट पैदा कर सकता है।यदि ऐसा होता है, तो सेंट्रीफ्यूज तापमान को 20-25 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें और लाइसिस मिश्रण और/या इथेनॉल पृथक्करण सतह पर तैरनेवाला को 37 डिग्री सेल्सियस पर पहले से गर्म करें।

कोई आरएनए नहीं निकाला गया या आरएनए उपज कम है

आमतौर पर कई कारक होते हैं जो पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करते हैं, जैसे: नमूना आरएनए सामग्री, संचालन विधि, निक्षालन मात्रा, आदि।

सामान्य कारणों का विश्लेषण नीचे दिया गया है:

1.ऑपरेशन के दौरान बर्फ स्नान या कम तापमान (4°C) सेंट्रीफ्यूजेशन किया गया।

सुझाव: पूरी प्रक्रिया में कमरे के तापमान (15-25 डिग्री सेल्सियस) पर काम करें, बर्फ स्नान और कम तापमान सेंट्रीफ्यूजेशन न करें।

       2.नमूने के अनुचित संरक्षण या नमूने के दीर्घकालिक संरक्षण के कारण आरएनए का क्षरण हो गया है।

सिफ़ारिश: ताजा एकत्र किए गए नमूनों को तरल नाइट्रोजन में जल्दी से जमे हुए किया जाना चाहिए, और फिर लंबे समय तक -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाना चाहिए, नमूनों को बार-बार जमने और पिघलने से बचाया जाना चाहिए;या नमूनों को तुरंत आरएनए स्टेबलाइज़र आरएनएलेटर समाधान (पशु नमूने) में भिगोएँ।

       3.अपर्याप्त नमूना विखंडन और लसीका के कारण शुद्धिकरण स्तंभ में रुकावट आती है।

सुझाव: टिश्यू को पीसते समय, कृपया सुनिश्चित करें कि टिश्यू पर्याप्त रूप से पिसा हुआ है, और इसे तुरंत पहले से तैयार बफर पीएसएल1 में स्थानांतरित करें (पुष्टि करें कि β-ME का सही अनुपात जोड़ा गया है, प्रक्रिया का चरण 1 देखें)।

4.एलुएंट गलत तरीके से जोड़ा गया था।

सुझाव: सुनिश्चित करें कि RNase-मुक्त ddH₂O को शुद्धिकरण स्तंभ झिल्ली के मध्य में टपकाया जाता है।

5. बफर पीएसएल2 या बफर पीआरडब्ल्यू2 में पूर्ण इथेनॉल की सही मात्रा नहीं जोड़ी गई थी।

सुझाव: कृपया निर्देशों का पालन करें, बफर पीएसएल2 और बफर पीआरडब्ल्यू2 में पूर्ण इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ें और किट का उपयोग करने से पहले अच्छी तरह मिलाएं।

6. ऊतक के नमूने की मात्रा अनुचित है।

सुझाव: बफ़र पीएसएल1 के प्रति 500 ​​μl 50 मिलीग्राम ऊतक का उपयोग करें।बहुत अधिक ऊतक का उपयोग करने से निकाले गए आरएनए की मात्रा कम हो जाएगी और परिणामी आरएनए की शुद्धता भी कम हो जाएगी।हम दृढ़ता से अनुशंसा करते हैं कि प्रारंभिक नमूना खुराक प्रति आरएनए निष्कर्षण ऑपरेशन 50 मिलीग्राम से अधिक नहीं होनी चाहिए।

7. अनुपयुक्त निक्षालन मात्रा या अपूर्ण निक्षालन।

सुझाव: शुद्धिकरण स्तंभ की तरल मात्रा 50-200 μl है;यदि निक्षालन प्रभाव संतोषजनक नहीं है, तो पहले से गरम RNase-मुक्त ddH जोड़ने के बाद कमरे के तापमान पर समय बढ़ाने की सिफारिश की जाती है₂हे, जैसे 5-10 मिनट।

8.बफ़र PRW2 से धोने के बाद शुद्धिकरण कॉलम में इथेनॉल अवशेष होता है।

   सुझाव: यदि खाली ट्यूब को 1 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और बफर पीआरडब्ल्यू2 में धोने के बाद भी इथेनॉल शेष रहता है, तो आप खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन का समय 2 मिनट तक बढ़ा सकते हैं, या अवशिष्ट इथेनॉल को पूरी तरह से हटाने के लिए शुद्धिकरण कॉलम को 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर रख सकते हैं।

9.किट का गलत इस्तेमाल किया गया.

   सुझाव: पॉलीफेनोलिक पॉलीसेकेराइड के पौधों के नमूनों के लिए, प्लांट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट जैसी सामान्य किट का उपयोग करने से आदर्श आरएनए नमूने प्राप्त करने में सक्षम नहीं हो सकते हैं।हम आपको प्लांट टोटल आरएनए आइसोलेशनकिट प्लस का उपयोग करने की सलाह देते हैं, जो विशेष रूप से पॉलीफेनोलिक पॉलीसेकेराइड संयंत्र नमूनों के लिए डिज़ाइन किया गया है।पॉलीफेनोल और पॉलीसेकेराइड पौधों के नमूनों से आरएनए निकालने के लिए विशेष रूप से विकसित एक किट।

OD260/OD280 का मान कम है

डीडीएच के साथ आरएनए निक्षालन₂O और स्पेक्ट्रोफोटोमीटर रीडिंग के लिए उपयोग किए जाने पर कम OD260/OD280 मान प्राप्त होते हैं।हम 10 एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच 7.5 (आरएनएस-फ्री डीडीएच के बजाय) का उपयोग करने की सलाह देते हैं₂O से elute RNA) अपेक्षाकृत सही OD260/OD280 मान प्राप्त करने के लिए, पृष्ठ 19 पर "RNA एकाग्रता और शुद्धिकरण परीक्षण" देखें।

शुद्ध आरएनए का क्षरण हो जाता है

शुद्ध आरएनए की गुणवत्ता नमूना संरक्षण, आरएनएएस संदूषण और हेरफेर जैसे कारकों से संबंधित है।

सामान्य कारणों का विश्लेषण:

1.ऊतक के नमूने एकत्र करने के बाद समय पर संग्रहीत नहीं किए गए थे।

    सिफ़ारिश: यदि ऊतक के नमूने संग्रह के बाद समय पर उपयोग नहीं किए जाते हैं, तो कृपया उन्हें तुरंत कम तापमान पर तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत करें या तरल नाइट्रोजन में त्वरित ठंड के बाद दीर्घकालिक भंडारण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर स्थानांतरित करें, या तुरंत नमूनों को आरएनए स्टेबलाइजर आरएनएलेटर समाधान (पशु नमूने) में डुबो दें।आरएनए निष्कर्षण के लिए, ताज़ा एकत्रित ऊतक नमूनों का उपयोग करने का प्रयास करें।

2.ऊतक के नमूनों का बार-बार जमना और पिघलना।

   सुझाव: ऊतक के नमूनों को संग्रहीत करते समय, संरक्षण के लिए उन्हें छोटे टुकड़ों में काटना सबसे अच्छा है, और नमूनों के बार-बार जमने और पिघलने के कारण होने वाले आरएनए के क्षरण से बचने के लिए उनका उपयोग करते समय उनमें से एक हिस्सा निकाल लें।

3.RNase को ऑपरेशन रूम में पेश किया जाता है या डिस्पोजेबल दस्ताने, मास्क आदि नहीं पहने जाते हैं।

   सुझाव: आरएनए निष्कर्षण प्रयोगों को अलग-अलग आरएनए ऑपरेशनों में करना सबसे अच्छा है, और प्रयोग से पहले प्रयोगशाला की मेज को साफ किया जाना चाहिए, और प्रयोग के दौरान डिस्पोजेबल दस्ताने और मास्क पहने जाने चाहिए ताकि आरएनएज़ की शुरूआत के कारण होने वाले आरएनए क्षरण से काफी हद तक बचा जा सके।

4. उपयोग के दौरान अभिकर्मक RNase द्वारा दूषित हो जाता है।

   सुझाव: संबंधित प्रयोगों के लिए प्लांट टोटल आरएनए निष्कर्षण किट की एक नई श्रृंखला के साथ बदलें।

5. आरएनए हेरफेर के लिए उपयोग की जाने वाली सेंट्रीफ्यूज ट्यूब और पिपेट युक्तियां आरएनएएस से दूषित हैं।

सुझाव: सुनिश्चित करें कि आरएनए निष्कर्षण में उपयोग की जाने वाली सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, पिपेट टिप, पिपेट आदि सभी आरएनसे-मुक्त हैं।

निर्देश पुस्तिका:

प्लांट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट निर्देश मैनुअल