सेल डायरेक्ट आरटी क्यूपीसीआर किट-एसवाईबीआर ग्रीन आई डायरेक्ट सेल लिसिस सेल रेडी वन-स्टेप क्यूआरटी-पीसीआर किट
विवरण
यह किट एक अद्वितीय लिसीस बफर सिस्टम का उपयोग करती है जो आरटी-क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए सुसंस्कृत सेल नमूनों से आरएनए को तुरंत जारी कर सकती है, जिससे समय लेने वाली और श्रमसाध्य आरएनए शुद्धिकरण प्रक्रिया समाप्त हो जाती है।आरएनए टेम्पलेट केवल 7 मिनट में प्राप्त किया जा सकता है।5×डायरेक्ट आरटी मिक्स और 2×किट द्वारा प्रदान किए गए प्रत्यक्ष क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर अभिकर्मक वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर परिणाम जल्दी और प्रभावी ढंग से प्राप्त कर सकते हैं।
5×डायरेक्ट आरटी मिक्स और 2×डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर में मजबूत अवरोधक सहनशीलता होती है, और नमूनों के लाइसेट को सीधे आरटी-क्यूपीसीआर के लिए टेम्पलेट के रूप में उपयोग किया जा सकता है।इस किट में अद्वितीय आरएनए उच्च-एफ़िनिटी फ़ोरजीन रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, और हॉट डी-टैक डीएनए पोलीमरेज़, डीएनटीपी, एमजीसीएल शामिल हैं।2, प्रतिक्रिया बफर, पीसीआर अनुकूलक और स्टेबलाइजर।
विशेष विवरण
200×20μएल आरएक्सएनएस, 1000×20μएल आरएक्सएनएस
किट घटक
| भाग I | बफर सीएल |
| फोरजीन प्रोटीज़ प्लस II | |
| बफर एस.टी | |
| भाग द्वितीय | डीएनए इरेज़र |
| 5× डायरेक्ट आरटी मिक्स | |
| 2× डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर | |
| 50× ROX संदर्भ डाई | |
| RNase-मुक्त ddH2O | |
| निर्देश | |
विशेषताएँ एवं लाभ
■सरल और प्रभावी: सेल डायरेक्ट आरटी तकनीक से, आरएनए नमूने केवल 7 मिनट में प्राप्त किए जा सकते हैं।
■ नमूने की मांग छोटी है, यहां तक कि कम से कम 10 कोशिकाओं का परीक्षण किया जा सकता है।
■ उच्च थ्रूपुट: यह 384, 96, 24, 12, 6-वेल प्लेटों में संवर्धित कोशिकाओं में आरएनए का तुरंत पता लगा सकता है।
■ डीएनए इरेज़र जारी जीनोम को तुरंत हटा सकता है, बाद के प्रयोगात्मक परिणामों पर प्रभाव को काफी कम कर सकता है।
■ अनुकूलित आरटी और क्यूपीसीआर प्रणाली दो-चरणीय आरटी-पीसीआर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन को अधिक कुशल और पीसीआर को अधिक विशिष्ट बनाती है, और आरटी-क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया अवरोधकों के प्रति अधिक प्रतिरोधी बनाती है।
किट आवेदन
आवेदन का दायरा: सुसंस्कृत कोशिकाएं।
- नमूना विश्लेषण द्वारा जारी आरएनए: केवल इस किट के आरटी-क्यूपीसीआर टेम्पलेट पर लागू होता है।
- किट का उपयोग निम्नलिखित उद्देश्यों के लिए किया जा सकता है: जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, siRNA-मध्यस्थता जीन साइलेंसिंग प्रभाव का सत्यापन, दवा स्क्रीनिंग, आदि।
आरेख
भंडारण और शेल्फ जीवन
इस किट के भाग I को 4℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए;भाग II को -20℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए।
फोरजीन प्रोटीज़ प्लस II को 4 पर संग्रहित किया जाना चाहिए℃, -20℃ पर जमें नहीं।
अभिकर्मक 2×डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर को -20 पर संग्रहित किया जाना चाहिए℃अंधेरे में;यदि बार-बार उपयोग किया जाए तो इसे 4 पर भी संग्रहीत किया जा सकता हैअल्पकालिक भंडारण के लिए ℃ (10 दिनों के भीतर उपयोग करें)।
रियल टाइम पीसीआर प्राइमर डिज़ाइन सिद्धांत
फॉरवर्ड प्राइमर और रिवर्स प्राइमर
रियल टाइम पीसीआर के लिए प्राइमर डिजाइन बहुत महत्वपूर्ण है।प्राइमर पीसीआर प्रवर्धन की विशिष्टता और दक्षता से संबंधित हैं, और इन्हें निम्नलिखित सिद्धांतों के संदर्भ में डिज़ाइन किया जा सकता है:
प्राइमर की लंबाई: 18-30bp.
जीसी सामग्री: 40-60%।
टीएम मान: प्राइमर डिज़ाइन सॉफ़्टवेयर, जैसे प्राइमर 5, प्राइमर का टीएम मान दे सकता है।अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमरों का टीएम मान यथासंभव करीब होना चाहिए।टीएम गणना सूत्र का भी उपयोग किया जा सकता है: टीएम = 4 डिग्री सेल्सियस (जी + सी) + 2 डिग्री सेल्सियस (ए + टी)।पीसीआर निष्पादित करते समय, 5 डिग्री सेल्सियस के प्राइमर टीएम मान से नीचे का तापमान आम तौर पर एनीलिंग तापमान के रूप में चुना जाता है (एनीलिंग तापमान में इसी वृद्धि से पीसीआर प्रतिक्रिया की विशिष्टता बढ़ सकती है)।
प्राइमर और पीसीआर उत्पाद:
डिज़ाइन प्राइमर पीसीआर प्रवर्धन उत्पाद की लंबाई अधिमानतः 100-150bp है।
टेम्पलेट के द्वितीयक संरचनात्मक क्षेत्र में डिज़ाइन प्राइमरों से जितना संभव हो बचा जाना चाहिए।
अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमरों के 3′ सिरों के बीच 2 या अधिक पूरक आधारों के निर्माण से बचें।
प्राइमर 3′ टर्मिनल बेस 3 अतिरिक्त लगातार जी या सी के साथ मौजूद नहीं हो सकता है।
प्राइमरों में स्वयं पूरक संरचनाएं नहीं हो सकतीं, अन्यथा एक हेयरपिन संरचना बन जाएगी, जो पीसीआर प्रवर्धन को प्रभावित करेगी।
एटीसीजी को प्राइमर अनुक्रम में यथासंभव समान रूप से वितरित किया जाना चाहिए, और 3' टर्मिनल बेस को टी के रूप में टाला जाना चाहिए।
परिशिष्ट 1：सेल डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट घटक पूरक पैक
1.कोशिका विश्लेषण समाधान
|
| |||
| किट घटक (24-कुआं लसीका प्रणाली/कुआं) | डीआरटी-01011-ए1 | डीआरटी-01011-ए2 | |
| 100 टी | 500 टी | ||
| भागमैं | बफर सीएल | 20 मि.ली | 100 मि.ली |
| फोरजीन प्रोटीज़ प्लस II | 400 μl | 1 मिली × 2 | |
| बफर एस.टी | 1 मिली × 2 | 10 मि.ली | |
| भागद्वितीय | डीएनए इरेज़र | 400 μl | 1 मिली × 2 |
2.आरटी मिक्स
|
| |
| किट घटक (20μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | डीआरटी-01011-बी1 |
| 200 टी | |
| 5× डायरेक्ट आरटी मिक्स | 800 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | 1.7 मिली × 2 |
|
| ||
| किट घटक (20μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | डीआरटी-01011-सी1 | डीआरटी-01011-सी2 |
| 200 टी | 1000 टी | |
| 2× डायरेक्ट क्यूपीसीआर मिक्स-एसवाईबीआर | 1 मिली × 2 | 1.7 मिली × 6 |
| 50× ROX संदर्भ डाई | 40 μl | 200 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | 1.7 मि.ली | 10 मि.ली |
निर्देश पुस्तिका:
QuickEasyTM सेल डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट-एसवाईबीआर ग्रीन I
