बुक्कल स्वैब/एफटीए कार्ड डीएनए आइसोलेशन किट जीनोमिक डीएनए एक्सट्रैक्शन या बुक्कल स्वैब से शुद्धिकरण किट
किट विवरण:
बुक्कल स्वाब/एफटीए कार्ड नमूनों से उच्च गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए को तुरंत शुद्ध करें।
◮कोई RNase संदूषण नहीं:किट द्वारा प्रदान किया गया डीएनए-ओनली कॉलम प्रयोग के दौरान RNase को जोड़े बिना जीनोमिक डीएनए से RNA को निकालना संभव बनाता है, जिससे प्रयोगशाला को बहिर्जात RNase द्वारा दूषित होने से बचाया जा सकता है।
◮तेज़ गति:फोरजीन प्रोटीज़ में समान प्रोटीज़ की तुलना में अधिक गतिविधि होती है, और ऊतक के नमूनों को जल्दी से पचाता है;ऑपरेशन सरल है, और जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण ऑपरेशन 20-80 मिनट के भीतर पूरा किया जा सकता है।
◮सुविधाजनक:सेंट्रीफ्यूजेशन कमरे के तापमान पर किया जाता है, और 4 डिग्री सेल्सियस कम तापमान वाले सेंट्रीफ्यूजेशन या डीएनए के इथेनॉल अवक्षेपण की कोई आवश्यकता नहीं होती है।
◮सुरक्षा:किसी कार्बनिक अभिकर्मक निष्कर्षण की आवश्यकता नहीं है।
◮उच्च गुणवत्ता:निकाले गए जीनोमिक डीएनए में बड़े टुकड़े हैं, कोई आरएनए नहीं, कोई आरएनएएस नहीं, और बहुत कम आयन सामग्री है, जो विभिन्न प्रयोगों की आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है।
◮सूक्ष्म-क्षालन प्रणाली:यह जीनोमिक डीएनए की सांद्रता को बढ़ा सकता है, जो डाउनस्ट्रीम पता लगाने या प्रयोग के लिए सुविधाजनक है।
विवरण
यह किट बुक्कल स्वैब और एफटीए कार्ड (रक्त के धब्बे) से उच्च-सांद्रता जीनोमिक डीएनए प्राप्त करने के लिए एक कुशल और तेज़ विधि प्रदान करती है।हमारी कंपनी का उपयोग करना'इसका अद्वितीय डीएनए-केवल सिलिका झिल्ली स्पिन कॉलम और फॉर्मूला, फोरजीन प्रोटीज़ के साथ मिलकर, उच्च-सांद्रता, उच्च-गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए को 80 मिनट में निकाला जा सकता है।विशेष रूप से डिज़ाइन किया गया छोटा शुद्धिकरण स्तंभ जीनोमिक डीएनए को बांधता है, और डीएनए को थोड़ी मात्रा में साफ किया जा सकता है (प्राप्त जीनोमिक डीएनए की सांद्रता बढ़ाने के लिए 15μl) रेफरेंस सिस्टम, जो डाउनस्ट्रीम पता लगाने या प्रयोग के लिए सुविधाजनक है।किट एक समय में एक या अधिक नमूनों को संसाधित कर सकती है, और शुद्धिकरण प्रक्रिया में फिनोल, क्लोरोफॉर्म और समय लेने वाली आइसोप्रोपेनॉल या इथेनॉल वर्षा जैसे कार्बनिक पदार्थों के निष्कर्षण की आवश्यकता नहीं होती है, और ऑपरेशन सरल और समय बचाने वाला है।
विशेष विवरण
50 तैयारी
किट घटक
| बफर ST1 |
| बफर ST2 |
| रैखिक एक्रिलामाइड |
| बफर पीडब्लू |
| बफर डब्ल्यूबी |
| बफर ईबी |
| फोरजीन प्रोटीज़ |
| डीएनए-केवल कॉलम |
| निर्देश |
विशेषताएँ एवं लाभ
-कोई RNase संदूषण नहीं: किट द्वारा प्रदान किया गया DNA-केवल कॉलम प्रयोग के दौरान RNase को जोड़े बिना जीनोमिक DNA से RNA को हटाना संभव बनाता है, जिससे प्रयोगशाला को बहिर्जात RNase द्वारा दूषित होने से बचाया जा सके।
-तेज गति: फोरजीन प्रोटीज में समान प्रोटीज की तुलना में अधिक गतिविधि होती है, नमूने जल्दी पच जाते हैं;सरल ऑपरेशन.
-सुविधाजनक: सेंट्रीफ्यूजेशन कमरे के तापमान पर किया जाता है, और 4°C कम तापमान वाले सेंट्रीफ्यूजेशन या डीएनए के इथेनॉल अवक्षेपण की कोई आवश्यकता नहीं होती है।
-सुरक्षा: किसी कार्बनिक अभिकर्मक निष्कर्षण की आवश्यकता नहीं है।
-उच्च गुणवत्ता: निकाले गए जीनोमिक डीएनए में बड़े टुकड़े हैं, कोई आरएनए नहीं है, कोई आरएनएएस नहीं है, और बहुत कम आयन सामग्री है, जो विभिन्न प्रयोगों की आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है।
-माइक्रो-एल्युशन सिस्टम: यह जीनोमिक डीएनए की सांद्रता को बढ़ा सकता है, जो डाउनस्ट्रीम का पता लगाने या प्रयोग के लिए सुविधाजनक है।
किट आवेदन
यह निम्नलिखित नमूनों से जीनोमिक डीएनए के शुद्धिकरण के लिए उपयुक्त है: बुक्कल स्वैब, एफटीए कार्ड (खून के धब्बे)।
भंडारण और शेल्फ जीवन
-इस किट को कमरे के तापमान (15-25 डिग्री सेल्सियस) पर शुष्क परिस्थितियों में 12 महीने तक संग्रहीत किया जा सकता है;यदि इसे लंबे समय तक संग्रहीत करने की आवश्यकता है, तो इसे 2-8°C पर संग्रहीत किया जा सकता है।
ध्यान दें: यदि घोल को कम तापमान पर संग्रहीत किया जाए, तो वर्षा होने का खतरा रहता है।उपयोग से पहले, घोल को कुछ समय के लिए कमरे के तापमान पर किट में रखना सुनिश्चित करें।यदि आवश्यक हो, तो अवक्षेप को घोलने के लिए इसे 37°C पानी के स्नान में 10 मिनट के लिए पहले से गर्म कर लें और उपयोग से पहले इसे मिला लें।
-फोरजीन प्रोटीज़ सॉल्यूशन का एक अनोखा फॉर्मूला होता है, जो लंबे समय (3 महीने) तक कमरे के तापमान पर संग्रहीत होने पर सक्रिय होता है;4°C पर संग्रहीत होने पर इसकी गतिविधि और स्थिरता बेहतर होगी, इसलिए इसे 4°C पर संग्रहीत करने की अनुशंसा की जाती है, याद रखें कि इसे -20°C पर न रखें।
शुद्धिकरण स्तंभ अवरुद्ध हो गया है
इस किट में, जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण ऑपरेशन में, शुद्धिकरण स्तंभ को सेंट्रीफ्यूजेशन चरण के बिना सीधे नमूना एंजाइमैटिक लिसीस मिश्रण पर सोख लिया जाता है, और नमूने के अपूर्ण एंजाइमीकरण और उच्च चिपचिपाहट के कारण शुद्धि स्तंभ अवरुद्ध हो सकता है।
निम्नलिखित संभावित कारण इस प्रकार हैं:
1. ऊतक नमूनों का अधूरा एंजाइमेटिक पाचन।
सिफ़ारिश: फोरजीन प्रोटीज़ का नमूना प्रसंस्करण समय उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है या सतह पर तैरनेवाला को 5 मिनट के लिए 12,000 आरपीएम (~ 13,400 × जी) पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद लिया जा सकता है।
2. ऊतक के नमूनों या बड़े ऊतकों का अत्यधिक उपयोग।
सिफ़ारिश: नमूने में 1 बुक्कल स्वाब से अधिक नहीं होना सबसे अच्छा है;यदि नमूना बहुत बड़ा है, तो तदनुसार बफर एसटी1, फोरजीन प्रोटीज़, बफर एसटी2 की खुराक बढ़ाएँ।
3. नमूना चिपचिपापन बहुत अधिक है।
सिफ़ारिश: जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण से पहले नमूनों को 10 एमएम ट्रिस-एचसीएल के साथ उचित रूप से पतला किया जा सकता है।
4. ब्लड कार्ड के टुकड़े चूस लिए गए हैं.
सिफ़ारिश: रक्त स्थान (एफटीए कार्ड) जीनोमिक निष्कर्षण के चरण 6 के क्षणिक सेंट्रीफ्यूजेशन समय को उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है।
कम उपज या कोई डीएनए नहीं
अक्सर ऐसे कई कारक होते हैं जो जीनोमिक डीएनए उपज को प्रभावित करते हैं, जिनमें नमूना उत्पत्ति, नमूना भंडारण की स्थिति, नमूना तैयार करना, हेरफेर आदि शामिल हैं।
निष्कर्षण के दौरान जीनोमिक डीएनए प्राप्त नहीं किया जा सकता है
संभावित कारण इस प्रकार हैं:
1. नमूनों के अनुचित संरक्षण या बहुत लंबे समय तक भंडारण से जीनोमिक डीएनए का क्षरण होता है।
सिफ़ारिश: मौखिक स्वाब का अधिमानतः ताजा नमूना लिया जाना चाहिए, और जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण कार्यों के लिए संरक्षित स्वाब का उपयोग करना उचित नहीं है;रक्त स्पॉट नमूनों को यह सुनिश्चित करना चाहिए कि गुणवत्ता योग्य है और भंडारण का समय बहुत लंबा नहीं होना चाहिए।
2. बहुत कम ऊतक उपयोग के परिणामस्वरूप संबंधित जीनोमिक डीएनए का निष्कर्षण नहीं हो सकता है।
सिफ़ारिश: ऑपरेशन गाइड में बुक्कल स्वाब सैंपलिंग निर्देशों का पालन करें, और जितनी बार संभव हो पोंछें ताकि जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण के लिए मौखिक स्वाब से पर्याप्त कोशिकाएं जुड़ी जा सकें;रक्त धब्बा नमूना निष्कर्षण के लिए, रक्त धब्बा काटने वाले क्षेत्र को उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है।
3. फोरजीन प्रोटीज़ को अनुचित तरीके से संरक्षित किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप इसकी गतिविधि में कमी या निष्क्रियता हो जाती है।
सिफ़ारिश: फोरजीन प्रोटीज़ की भंडारण स्थितियों की पुष्टि करें या एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया के लिए इसे एक नए फोरजीन प्रोटीज़ से बदलें।
4. किट का अनुचित संरक्षण या भंडारण का समय बहुत लंबा है, जिसके परिणामस्वरूप किट के कुछ घटक विफल हो जाते हैं।
सिफ़ारिश: संबंधित प्रक्रियाओं के लिए एक नया बुक्कल स्वैब डीएनए आइसोलेशन किट खरीदें।
5. बफर डब्ल्यूबी पूर्ण इथेनॉल नहीं जोड़ता है।
सिफ़ारिश: पुष्टि करें कि बफर डब्ल्यूबी पूर्ण इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ता है।
6. सिलिकॉन फिल्म में एलुएंट सही ढंग से नहीं मिलाया गया है।
सिफ़ारिश: सिलिकॉन झिल्ली के बीच में 65 डिग्री सेल्सियस पूर्व-गर्म एलुएंट बूंदें जोड़ें और एलुएंट दक्षता बढ़ाने के लिए कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए छोड़ दें।
कम उपज वाले जीनोमिक डीएनए को अलग किया गया
निम्नलिखित संभावित कारण इस प्रकार हैं:
1. नमूनों के अनुचित संरक्षण या बहुत लंबे समय तक भंडारण से जीनोमिक डीएनए का क्षरण होता है।
सिफ़ारिश: मौखिक स्वाब को अधिमानतः ताजा नमूना लिया जाता है, और संरक्षित स्वाब का उपयोग जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण के लिए नहीं किया जाना चाहिए।
2. यदि ऊतक के नमूने की मात्रा बहुत छोटी है, तो निकाली गई जीनोमिक डीएनए सामग्री कम होगी।
सिफ़ारिश: ऑपरेटिंग गाइड में मौखिक स्वाब नमूनाकरण निर्देशों का पालन करें, जितनी बार संभव हो पोंछें ताकि जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण के लिए मौखिक स्वाब से पर्याप्त कोशिकाओं को जोड़ा जा सके।
3. फोरजीन प्रोटीज़ को अनुचित तरीके से संरक्षित किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप इसकी गतिविधि में कमी या निष्क्रियता हो जाती है।
सिफ़ारिश: फोरजीन प्रोटीज़ की भंडारण स्थितियों की पुष्टि करें या एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया के लिए इसे एक नए फोरजीन प्रोटीज़ से बदलें।
4. एलुएंट समस्याएं.
सिफ़ारिश: निक्षालन के लिए बफर ईबी का उपयोग करें;यदि डीडीएच का उपयोग कर रहे हैं2ओ या अन्य निक्षालक, पुष्टि करें कि निक्षालक का पीएच 7.0-8.5 के बीच है।
5. एलुएट को बूंद-बूंद करके सही ढंग से नहीं जोड़ा गया है।
सिफ़ारिश: सिलिकॉन झिल्ली के बीच में एलुएंट बूंदें डालें और एलुएंट दक्षता बढ़ाने के लिए कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए छोड़ दें।
6. निक्षालन द्रव बहुत कम जमा होता है।
सिफ़ारिश: निर्देशों में आवश्यकतानुसार जीनोमिक डीएनए निक्षालन के लिए एलुएंट का उपयोग करें, कम से कम 15 μl से कम नहीं।
पृथक जीनोमिक डीएनए की कम शुद्धता
कम जीनोमिक डीएनए शुद्धता से डाउनस्ट्रीम प्रयोगों की विफलता या असंतोषजनक परिणाम हो सकते हैं, जैसे: एंजाइमों को काटा नहीं जा सकता, पीसीआर को रुचि का जीन टुकड़ा नहीं मिल सकता है, आदि।
संभावित कारण इस प्रकार हैं:
1. हेटरोप्रोटीन प्रदूषण, आरएनए प्रदूषण।
विश्लेषण: शुद्धि स्तंभ को बफ़र पीडब्लू का उपयोग करके नहीं धोया गया था;बफ़र पीडब्लू वॉश शुद्धिकरण कॉलम को सही केन्द्रापसारक गति का उपयोग करके नहीं धोया गया था।
सिफ़ारिश: इथेनॉल जोड़ने से पहले सुनिश्चित करें कि सतह पर तैरनेवाला में कोई अवक्षेपण न हो;निर्देशों के अनुसार शुद्धि स्तंभ को धोना सुनिश्चित करें, और इस चरण को छोड़ा नहीं जा सकता है।
2. अशुद्धि आयन प्रदूषण.
विश्लेषण: बफर डब्ल्यूबी वॉश शुद्धि कॉलम को छोड़ दिया गया या केवल एक बार धोया गया, जिसके परिणामस्वरूप अवशिष्ट आयनिक संदूषण हुआ।
सिफ़ारिश: जितना संभव हो सके अवशिष्ट आयनों को हटाने के लिए निर्देशानुसार बफर डब्ल्यूबी को 2 बार धोना सुनिश्चित करें।
3. आरएनए एंजाइम संदूषण।
विश्लेषण: विदेशी RNases को बफ़र में जोड़ा गया;बफ़र पीडब्लू वॉश ऑपरेशन गलत था, जिसके परिणामस्वरूप आरएनएएस अवशेष बने, जिससे डाउनस्ट्रीम आरएनए प्रयोगात्मक संचालन प्रभावित हुए, जैसे कि इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन।
सिफ़ारिश: फोरजीन श्रृंखला न्यूक्लिक एसिड आइसोलेशन किट आरएनएज़ को अतिरिक्त जोड़ने के बिना आरएनए को हटा सकती है, इस प्रकार बुक्कल स्वैब/एफटीए कार्ड डीएनए आइसोलेशन किट को आरएनएज़ जोड़ने की आवश्यकता नहीं है;बफ़र पीडब्लू वाशिंग शुद्धिकरण कॉलम के निर्देशों का पालन करना सुनिश्चित करें, और इस चरण को छोड़ा नहीं जा सकता है।
4. इथेनॉल अवशेष।
विश्लेषण: बफर डब्ल्यूबी ने शुद्धि स्तंभ को धोने के बाद खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन नहीं किया।
सिफ़ारिश: निर्देशों के अनुसार सही खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन ऑपरेशन करें।
5. अन्य अशुद्धता प्रदूषण.
विश्लेषण: सहेजे गए नमूनों या विशेष नमूनों का पूर्व उपचार नहीं किया जाता है।
सिफ़ारिश: निर्देशानुसार नमूने का पूरी तरह से पूर्व-उपचार करें।
