समस्याओं के विश्लेषण के लिए मार्गदर्शिकाएँ

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

कोई आरएनए नहीं निकाला जा सकता है या न्यूक्लिक एसिड की उपज कम है

आमतौर पर कई कारक होते हैं जो पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करते हैं, जैसे: नमूना आरएनए सामग्री, संचालन की विधि, निक्षालन मात्रा, आदि।。

सामान्य कारणों का विश्लेषण：

1. ऑपरेशन के दौरान बर्फ स्नान या कम तापमान (4 डिग्री सेल्सियस) सेंट्रीफ्यूजेशन।

सुझाव: कमरे के तापमान (15-25 डिग्री सेल्सियस) पर संचालन, कभी बर्फ स्नान और कम तापमान सेंट्रीफ्यूज नहीं।

2. अनुचित नमूना भंडारण या बहुत लंबे समय तक नमूना भंडारण।

सुझाव: नमूनों को -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित करें या तरल नाइट्रोजन में फ्रीज करें, और बार-बार फ्रीज-पिघलने के उपयोग से बचें;आरएनए निष्कर्षण के लिए ताज़ा एकत्रित नमूनों का उपयोग करने का प्रयास करें।

3.अपर्याप्त नमूना विश्लेषण

सिफ़ारिश: कृपया सुनिश्चित करें कि नमूना और कार्यशील घोल (लीनियर एक्रिलामाइड) को अच्छी तरह मिश्रित किया गया है और कमरे के तापमान (15-25 डिग्री सेल्सियस) पर 10 मिनट के लिए रखा गया है।

4.एलुएंट गलत तरीके से जोड़ा गया था

सिफ़ारिश: सुनिश्चित करें कि शुद्धिकरण स्तंभ की झिल्ली के मध्य में RNase-मुक्त ddH2O जोड़ा गया है

5. बफर viRW2 में निर्जल इथेनॉल की अनुचित मात्रा

सुझाव: कृपया निर्देशों का पालन करें, बफर viRW2 में निर्जल इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ें और किट का उपयोग करने से पहले उन्हें अच्छी तरह मिलाएं。

6.अनुचित नमूना उपयोग।

सुझाव: बफर viRL के प्रति 500μl नमूना 200μl।अत्यधिक नमूना मात्रा के परिणामस्वरूप आरएनए निष्कर्षण दर कम हो जाएगी।

7.अनुचित निक्षालन मात्रा या अपूर्ण निक्षालन।

सुझाव: शुद्धिकरण स्तंभ की तरल मात्रा 30-50μl है;यदि निक्षालन प्रभाव संतोषजनक नहीं है, तो पहले से गरम RNase-मुक्त ddH जोड़ने की अनुशंसा की जाती है₂O और कमरे के तापमान पर रखने का समय बढ़ाएँ, जैसे कि 5-10 मिनट

8. शुद्धिकरण कॉलम में बफर viRW2 में धोने के बाद इथेनॉल अवशेष होता है।

सुझाव: यदि बफर viRW2 में धोने और 2 मिनट के लिए खाली-ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद भी इथेनॉल बचता है, तो शेष इथेनॉल को पूरी तरह से हटाने के लिए शुद्धि कॉलम को खाली-ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ा जा सकता है।

शुद्ध आरएनए अणुओं का क्षरण

शुद्ध आरएनए की गुणवत्ता नमूना भंडारण, आरएनएएस संदूषण और संचालन जैसे कारकों से संबंधित है।

सामान्य कारणों का विश्लेषण：

1. एकत्रित नमूनों को समय पर सहेजा नहीं गया।

सुझाव: यदि नमूना संग्रह के बाद समय पर उपयोग नहीं किया जाता है, तो कृपया इसे तुरंत -80 ℃ या तरल नाइट्रोजन पर संग्रहित करें।आरएनए अणुओं के निष्कर्षण के लिए, जब भी संभव हो ताजा एकत्र किए गए नमूनों का उपयोग करने का प्रयास करें।

2.एकत्रित नमूने बार-बार जम रहे थे और पिघल रहे थे।

सुझाव: नमूना संग्रह और भंडारण के दौरान बार-बार जमने और पिघलने (एक बार से अधिक नहीं) से बचें, अन्यथा न्यूक्लिक एसिड की उपज कम हो जाएगी।

3.ऑपरेटिंग रूम में RNase की शुरुआत की गई थी या कोई डिस्पोजेबल दस्ताने, मास्क आदि नहीं पहने गए थे।

सुझाव: आरएनए अणुओं का निष्कर्षण प्रयोग एक अलग आरएनए ऑपरेशन कक्ष में किया जाना सबसे अच्छा है, और प्रयोग से पहले प्रयोगात्मक तालिका को साफ किया जाता है।RNase परिचय के कारण होने वाले RNA क्षरण से बचने के लिए प्रयोग के दौरान डिस्पोजेबल दस्ताने और मास्क पहनें।

4. उपयोग के दौरान अभिकर्मक RNase द्वारा दूषित हो जाता है।

सुझाव: संबंधित प्रयोगों के लिए नए वायरल आरएनए आइसोलेशन किट से बदलें।

5. सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, पिपेट टिप आदि का RNase संदूषण। सुझाव: सुनिश्चित करें कि सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, पिपेट टिप्स और पिपेट सभी RNase-मुक्त हैं।

शुद्ध आरएनए अणुओं ने डाउनस्ट्रीम प्रयोगों को प्रभावित किया

यदि बहुत अधिक नमक आयन या प्रोटीन हैं, तो शुद्धि स्तंभ द्वारा शुद्ध किए गए आरएनए अणु डाउनस्ट्रीम प्रयोगों को प्रभावित करेंगे, जैसे: रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, नॉर्दर्न ब्लॉट, आदि।。

1. निक्षालित आरएनए अणुओं में नमक आयन शेष हैं।

अनुशंसा: सुनिश्चित करें कि बफर viRW2 में निर्जल इथेनॉल की सही मात्रा जोड़ी गई है, और ऑपरेटिंग निर्देशों पर सही सेंट्रीफ्यूजेशन गति के अनुसार शुद्धिकरण कॉलम को दो बार धोएं; यदि अभी भी नमक आयन शेष हैं, तो आप बफर viRW2 को शुद्धिकरण कॉलम में जोड़ सकते हैं, और इसे 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ सकते हैं।फिर नमक आयनों के संदूषण को अधिकतम सीमा तक हटाने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन करें

2. निक्षालित आरएनए अणुओं में इथेनॉल शेष है

सुझाव: एक बार यह पुष्टि करने के बाद कि शुद्धिकरण स्तंभों को बफर viRW2 द्वारा धोया गया है, ऑपरेटिंग निर्देशों पर केन्द्रापसारक गति के अनुसार खाली-ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन करें।यदि अभी भी इथेनॉल शेष है, तो शेष इथेनॉल को अधिकतम सीमा तक निकालने के लिए खाली ट्यूब सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद इसे कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए छोड़ा जा सकता है।

निर्देश पुस्तिका:

वायरल आरएनए आइसोलेशन किट निर्देश मैनुअल