कोई प्रवर्धन संकेत नहीं

1. किट में टैक डीएनए पॉलीमरेज़ अनुचित भंडारण या किट की समाप्ति के कारण अपनी गतिविधि खो देता है।
सिफ़ारिश: किट की भंडारण स्थितियों की पुष्टि करें;पीसीआर सिस्टम में उचित मात्रा में टाक डीएनए पॉलीमरेज़ को दोबारा जोड़ें या संबंधित प्रयोगों के लिए एक नया रियल टाइम पीसीआर किट खरीदें।

2. डीएनए टेम्प्लेट में टैक डीएनए पॉलीमरेज़ के बहुत सारे अवरोधक हैं।
सुझाव: टेम्प्लेट को दोबारा शुद्ध करें या उपयोग किए गए टेम्प्लेट की मात्रा कम करें।

3.Mg2+ सांद्रता उपयुक्त नहीं है।
सिफ़ारिश: हमारे द्वारा प्रदान किए गए 2× रियल पीसीआर मिक्स की Mg2+ सांद्रता 3.5mM है।हालाँकि, कुछ विशेष प्राइमरों और टेम्पलेट्स के लिए, Mg2+ सांद्रता अधिक हो सकती है।इसलिए, आप Mg2+ सांद्रता को अनुकूलित करने के लिए सीधे MgCl2 जोड़ सकते हैं।अनुकूलन के लिए हर बार Mg2+ 0.5mM बढ़ाने की अनुशंसा की जाती है।

4. पीसीआर प्रवर्धन स्थितियां उपयुक्त नहीं हैं, और प्राइमर अनुक्रम या एकाग्रता अनुचित है।
सुझाव: प्राइमर अनुक्रम की शुद्धता की पुष्टि करें और प्राइमर ख़राब नहीं हुआ है;यदि प्रवर्धन संकेत अच्छा नहीं है, तो एनीलिंग तापमान को कम करने और प्राइमर एकाग्रता को उचित रूप से समायोजित करने का प्रयास करें।

5. टेम्पलेट की मात्रा बहुत कम या बहुत अधिक है.
सिफ़ारिश: टेम्पलेट रैखिककरण ग्रेडिएंट कमजोरीकरण करें, और वास्तविक समय पीसीआर प्रयोग के लिए सर्वोत्तम पीसीआर प्रभाव के साथ टेम्पलेट एकाग्रता का चयन करें।

एनटीसी का प्रतिदीप्ति मान बहुत अधिक है

1. ऑपरेशन के दौरान होने वाला अभिकर्मक संदूषण।
सिफ़ारिश: रियल टाइम पीसीआर प्रयोगों के लिए नए अभिकर्मकों के साथ बदलें।

2. पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी के दौरान संदूषण हुआ।
सिफ़ारिश: ऑपरेशन के दौरान आवश्यक सुरक्षात्मक उपाय करें, जैसे: लेटेक्स दस्ताने पहनना, फ़िल्टर के साथ पिपेट टिप का उपयोग करना आदि।

3. प्राइमरों का क्षरण होता है, और प्राइमरों के क्षरण से गैर-विशिष्ट प्रवर्धन हो जाएगा।
सुझाव: यह पता लगाने के लिए एसडीएस-पेज इलेक्ट्रोफोरेसिस का उपयोग करें कि क्या प्राइमर ख़राब हो गए हैं, और उन्हें रियल टाइम पीसीआर प्रयोगों के लिए नए प्राइमरों से बदलें।

प्राइमर डिमर या गैर-विशिष्ट प्रवर्धन

1.Mg2+ सांद्रता उपयुक्त नहीं है।
सिफ़ारिश: हमारे द्वारा प्रदान किए गए 2× रियल पीसीआर EasyTM मिक्स की Mg2+ सांद्रता 3.5 mM है।हालाँकि, कुछ विशेष प्राइमरों और टेम्पलेट्स के लिए, Mg2+ सांद्रता अधिक हो सकती है।इसलिए, आप Mg2+ सांद्रता को अनुकूलित करने के लिए सीधे MgCl2 जोड़ सकते हैं।अनुकूलन के लिए हर बार Mg2+ 0.5mM बढ़ाने की अनुशंसा की जाती है।

2. पीसीआर एनीलिंग तापमान बहुत कम है।
सुझाव: पीसीआर एनीलिंग तापमान को हर बार 1℃ या 2℃ तक बढ़ाएं।

3. पीसीआर उत्पाद बहुत लंबा है।
सिफ़ारिश: रियल टाइम पीसीआर उत्पाद की लंबाई 100-150bp के बीच होनी चाहिए, 500bp से अधिक नहीं।

4. प्राइमरों का क्षरण होता है, और प्राइमरों के क्षरण से विशिष्ट प्रवर्धन का आभास होगा।
सुझाव: यह पता लगाने के लिए एसडीएस-पेज इलेक्ट्रोफोरेसिस का उपयोग करें कि क्या प्राइमर ख़राब हो गए हैं, और उन्हें रियल टाइम पीसीआर प्रयोगों के लिए नए प्राइमरों से बदलें।

5. पीसीआर प्रणाली अनुचित है, या प्रणाली बहुत छोटी है।
सुझाव: पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली बहुत छोटी है जिससे पता लगाने की सटीकता कम हो जाएगी।रियल टाइम पीसीआर प्रयोग को दोबारा चलाने के लिए मात्रात्मक पीसीआर उपकरण द्वारा अनुशंसित प्रतिक्रिया प्रणाली का उपयोग करना सबसे अच्छा है।

मात्रात्मक मूल्यों की खराब पुनरावृत्ति

1. उपकरण ख़राब है.
सुझाव: उपकरण के प्रत्येक पीसीआर छेद के बीच त्रुटियां हो सकती हैं, जिसके परिणामस्वरूप तापमान प्रबंधन या पता लगाने के दौरान खराब प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता हो सकती है।कृपया संबंधित उपकरण के निर्देशों के अनुसार जांच करें।

2.नमूने की शुद्धता अच्छी नहीं है।
सिफ़ारिश: अशुद्ध नमूनों से प्रयोग की पुनरुत्पादन क्षमता ख़राब हो जाएगी, जिसमें टेम्पलेट और प्राइमरों की शुद्धता शामिल है।टेम्प्लेट को दोबारा शुद्ध करना सबसे अच्छा है, और प्राइमर को एसडीएस-पेज द्वारा सबसे अच्छा शुद्ध किया जाता है।

3. पीसीआर प्रणाली की तैयारी और भंडारण का समय बहुत लंबा है।
सुझाव: तैयारी के तुरंत बाद पीसीआर प्रयोग के लिए रियल टाइम पीसीआर प्रणाली का उपयोग करें, और इसे बहुत लंबे समय तक अलग न रखें।

4. पीसीआर प्रवर्धन स्थितियां उपयुक्त नहीं हैं, और प्राइमर अनुक्रम या एकाग्रता अनुचित है।
सुझाव: प्राइमर अनुक्रम की शुद्धता की पुष्टि करें और प्राइमर ख़राब नहीं हुआ है;यदि प्रवर्धन संकेत अच्छा नहीं है, तो एनीलिंग तापमान को कम करने और प्राइमर एकाग्रता को उचित रूप से समायोजित करने का प्रयास करें।

5. पीसीआर प्रणाली अनुचित है, या प्रणाली बहुत छोटी है।
सुझाव: पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली बहुत छोटी है जिससे पता लगाने की सटीकता कम हो जाएगी।रियल टाइम पीसीआर प्रयोग को दोबारा चलाने के लिए मात्रात्मक पीसीआर उपकरण द्वारा अनुशंसित प्रतिक्रिया प्रणाली का उपयोग करना सबसे अच्छा है।