A260/A230 का निम्न अनुपात आमतौर पर 230 एनएम पर अधिकतम अवशोषण तरंग दैर्ध्य वाली अशुद्धियों के कारण होता है।आइए देखें कि इन अशुद्धियों में क्या शामिल है:

• सामान्य प्रदूषक	अवशोषण तरंगदैर्घ्य	अनुपात प्रभाव
  प्रोटीन	~230एनएम और 280एनएम	ए की एक साथ कमी260/A 280और ए260/A 280अनुपात
  गुआनिडीन नमक	220-240 एनएम	ए कम करें260/A 280अनुपात
  फिनोल	~270एनएम	-
  ट्राइज़ोल	~230एनएम और 270एनएम	ए कम करें260/A 280अनुपात
  EDTA	~230एनएम	ए कम करें260/A 280अनुपात
  इथेनॉल	230-240 एनएम	ए कम करें260/A 280अनुपात

 
 
 
सामान्य प्रदूषकों का अवशोषण तरंगदैर्घ्य और कंट्रास्ट मान

Pरोटिन संदूषण
न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण प्रक्रिया में प्रोटीन प्रदूषण को सबसे आम प्रदूषण माना जा सकता है।प्रोटीन ऊपरी जलीय चरण और निचले जलीय चरण के बीच मौजूद होता हैकार्बनिकअवस्था ।प्रदूषण एक ही समय में A260/A280 और A260/A230 के अनुपात को कम कर देगा, और A260/A230 का अनुपात A260/A280 के अनुपात की तुलना में अधिक स्पष्ट रूप से बदल जाएगा।
बाद के दौरानरिवर्स प्रतिलेखनor क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाएं, प्रोटीन अवशेष एंजाइम के कार्य को बाधित या बाधित कर सकते हैं.प्रोटीन संदूषण से बचने का सबसे अच्छा तरीका सतह पर तैरनेवाला को ग्रहण करते समय "अधिक की तुलना में कम, कई बार थोड़ी मात्रा" के सिद्धांत को ध्यान में रखना है।

2. ग्वानिडिनियम प्रदूषण
हाइड्रोक्लोराइड (GuHCl) और गुआनिडाइन थायोसाइनेट (GTC) में प्रोटीन को विकृत करने का प्रभाव होता है, जो न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण प्रक्रिया के दौरान कोशिका झिल्ली को जल्दी से नष्ट कर सकता है, जिससे प्रोटीन विकृतीकरण और वर्षा होती है।गुएचसीएल और जीटीसी की अवशोषण तरंग दैर्ध्य 220-240 एनएम के बीच है, औरअवशिष्ट गनीडिनियम नमक A260/A230 के अनुपात को कम कर देगा.यद्यपि अवशिष्ट ग्वानिडिनियम नमक अनुपात को कम कर देगा,डाउनस्ट्रीम प्रयोगों पर प्रभाव वास्तव में नगण्य है.

3. ट्राइज़ोल संदूषण
ट्राइज़ोल का मुख्य घटक फिनोल है।फिनोल का मुख्य कार्य कोशिकाओं को नष्ट करना और कोशिकाओं में प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड पदार्थों को छोड़ना है।हालाँकि फिनोल प्रोटीन को प्रभावी ढंग से विकृत कर सकता है, लेकिन यह RNase गतिविधि को पूरी तरह से बाधित नहीं कर सकता है।इसलिए, अंतर्जात और बहिर्जात RNase को रोकने के लिए TRIzol में 8-हाइड्रॉक्सीक्विनोलिन, गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट, β-मर्कैप्टोएथेनॉल आदि मिलाए जाते हैं।
सेलुलर आरएनए निकालते समय, ट्राइज़ोल तेजी से कोशिकाओं को नष्ट कर सकता है और कोशिकाओं से निकलने वाले न्यूक्लीज़ को रोक सकता है, और अवशिष्ट ट्राइज़ोल A260/A230 के अनुपात को काफी कम कर देगा।
प्रसंस्करण विधि: सेंट्रीफ्यूजिंग करते समय, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि ट्राइज़ोल में फिनोल 4° और कमरे के तापमान की स्थिति में पानी के चरण में आसानी से घुलनशील है।

4. इथेनॉल अवशेष
इथेनॉल का उपयोग अंतिम प्रक्रिया में डीएनए को अवक्षेपित करने और डीएनए से बंधे नमक आयनों को घोलने के लिए किया जाता है।उच्चतम की अवशोषण तरंग दैर्ध्यअवशोषण शिखरइथेनॉल भी 230-240 एनएम पर है, जोA260/A230 का अनुपात भी कम हो जाएगा.
इथेनॉल अवशेषों से बचने की विधि को अंतिम निक्षालन के दौरान दो बार दोहराया जा सकता हैधुएं का हुडरेफरेंस के लिए बफर जोड़ने से पहले इथेनॉल को पूरी तरह से वाष्पित होने देने के लिए दो मिनट तक रखें।
हालाँकि, यह ज्ञात होना चाहिए कि अनुपात केवल आरएनए गुणवत्ता का मूल्यांकन सूचकांक है।यदि उपर्युक्त परिचालनों को कड़ाई से विनियमित किया जाता है, तो अनुपात और मानक सीमा के बीच विचलन का डाउनस्ट्रीम प्रयोगों पर बहुत अधिक प्रभाव नहीं पड़ेगा।
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