डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट II
किट विवरण:
◮डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट, फॉरेजीन द्वारा विकसित फोरेजी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस और फोरेजी एचएस टैक डीएनए पॉलीमरेज़ का उपयोग करके, अद्वितीय प्रतिक्रिया बफर के साथ, इस किट को मजबूत प्रतिरोध और अनुकूलता के साथ बनाता है, और यह सीधे प्रतिक्रिया का परीक्षण कर सकता है, फोरेजीन लिसिस सिस्टम को टेम्पलेट के रूप में उपयोग कर सकता है।यह किट COVID-19 न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन किट और अन्य रोगजनक बैक्टीरिया न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन किट विकास के लिए आवेदन कर सकती है।
विवरण
डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट अलग से पैक किया गया आरटी-क्यूपीसीआर बफर, उच्च कुशल फोरेसी एचएस टैक डीएनए पॉलीमरेज़ प्रदान करता हैऔर फोरेसी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (एमएमएलवी),सरल सत्यापन के भीतर, बैक-एंड किट बनाने और सिस्टम समायोजन को सुविधाजनक बनाना।
डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट, फॉरेजीन द्वारा विकसित फोरेजी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस और फोरेजी एचएस टैक डीएनए पॉलीमरेज़ का उपयोग करके, अद्वितीय प्रतिक्रिया बफर के साथ, इस किट को मजबूत प्रतिरोध और अनुकूलता के साथ बनाता है, और यह सीधे प्रतिक्रिया का परीक्षण कर सकता है, फोरेजीन लिसिस सिस्टम को टेम्पलेट के रूप में उपयोग कर सकता है।यह किट COVID-19 न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन किट और अन्य रोगजनक बैक्टीरिया न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन किट विकास के लिए आवेदन कर सकती है।
यह किट आसानी से और तेजी से उपयोग करके सीधे आईवीडी उत्पाद का घटक हो सकता है।इसे दोबारा विकसित किए बिना, केवल आसान सत्यापन की आवश्यकता है।
विशेष विवरण
500टी, 50,000टी
किट घटक
| किट सामग्री (20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली) | आईएम-05111-02 | आईएम-05112-02 |
| 500 टी | 50,000 टी | |
| फ़ोरेसी आररिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (200 यू/μL) | 50 μL×1 | 1 एमएल×5 |
| फोरेसी एचएस टैक डीएनए पोलीमरेज़ (5 यू/μL) | 100 μL×1 | 1 एमएल×10 |
| 2× डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआरबफर | 1 एमएल ×5 | 500 एमएल ×1 |
| अनुदेश | 1 | 1 |
परिचालन चरण
ए: टेम्पलेट और अभिकर्मक तैयार करें
1. तैयार आरएनए टेम्पलेट तैयार करें (आरएनए टेम्पलेट को निकालने और शुद्ध करने के लिए फोरजीन टोटल आरएनए आइसोलेशन किट श्रृंखला किट का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है) या नमूना क्रैकिंग उत्पाद (फोरजीन लिसिस सिस्टम का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है), विशिष्ट प्राइमर (10 μM) और अन्य प्रासंगिक उपभोग्य वस्तुएं, उपकरण।
2. 2× डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर बफर, RNase-फ्री ddH2O और 20× ROX रेफरेंस डाई (यदि इसकी आवश्यकता है) को बर्फ के साथ बॉक्स में रखें, जिससे ये प्राकृतिक रूप से पिघल जाएं और धीरे से मिश्रित हो जाएं।
बी: आरटी-क्यूपीसीआर प्रणाली तैयार करें
प्रतिक्रिया प्रणाली के प्रतिक्रिया बफर की आधी मात्रा प्राप्त करें (उदाहरण के लिए, यदि सिस्टम की मात्रा 20 μL है, तो इसे 10 μL 2× डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर बफर प्राप्त करने की आवश्यकता है). के लिएएंजाइम की संगत मात्रा,हम ऐसा सुझाव देते हैंएम-एमएलवी:10-30 यू/20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली,तकडीएनए पोलीमरेज़：1-2 यू/20 μL प्रतिक्रिया प्रणालीयह हमारा सुझाव है, आपको इसका परीक्षण और समायोजन करना चाहिए), आरएनए टेम्पलेट, विशिष्ट प्राइमर और जांच जोड़ें, और आरएनएएस-फ्री डीडीएच जोड़ें2O से 20 μL.आरटी-क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली की विशिष्ट तैयारी को निम्नलिखित तालिका 1 में देखा जा सकता है।
तालिका 1: आरटी-क्यूपीसीआर प्रणाली की तैयारी
| अवयव | आयतन | अंतिम एकाग्रता |
| 2× डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर बफर | 10 μL | 1× |
| फोरेसी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (एमएमएलवी) | 10-30 यू | |
| फोरेसी एचएस टैक डीएनए पोलीमरेज़ | 1-2 यू | |
| फॉरवर्ड प्राइमर(10 μM) | 0.8 μL | 50-900 एनएम |
| रिवर्स प्राइमर(10 μM) | 0.8 μL | 50-900 एनएम |
| जांच(4 μM) | 1 μL | 200nM |
| टेम्पलेट (आरएनए या लाइसेट) | एक्स μL | |
| 20× ROX संदर्भ डाई | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-एक्स) μL | |
| कुल मात्रा | 20 μL |
नोट: फॉरवर्ड प्राइमर और रिवर्स प्राइमर लक्ष्य जीन के विशिष्ट प्राइमर हैं।क्यूपीसीआर की प्रणाली को व्यावहारिक प्रयोगात्मक और पीसीआर मॉडल के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।हम अधिकांश प्राइमरों की अंतिम सांद्रता के लिए 400nM की अनुशंसा करते हैं।कृपया तैयार सांद्रता और अनुशंसित अंतिम सांद्रता के अनुसार विशिष्ट प्राइमरों और जांच की मात्रा को समायोजित करें।
1*: विभिन्न मात्रात्मक पीसीआर उपकरणों के अनुसार आरओएक्स संदर्भ डाई की उपयुक्त अंतिम सांद्रता का चयन करें।सामान्य मात्रात्मक पीसीआर उपकरणों की इष्टतम आरओएक्स संदर्भ डाई सांद्रता निम्नलिखित तालिका में दिखाई गई है:
| मात्रात्मक पीसीआर उपकरण | ROX संदर्भ डाई की अंतिम सांद्रता |
| एबीआई प्रिज्म 7000/7300/7700/7900HT/चरण एक,वगैरह। | 1× (उदाहरण के लिए, 20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली में 1μl 20×ROX संदर्भ डाई जोड़ें) |
| एबीआई 7500, 7500 फास्ट, स्ट्रैटेजीन एमएक्स3000पी, एमएक्स3005पी और एमएक्स4000, आदि। | 0.5× (उदाहरण के लिए, 20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली में 0.5μl 20×ROX संदर्भ डाई जोड़ें) |
| रोश पीसीआर उपकरण, बायो-रेड पीसीआर उपकरण, एपेंडॉर्फ मात्रात्मक पीसीआर उपकरण, आदि। | ROX संदर्भ डाई के बिना |
भंडारण और शेल्फ जीवन
किट को -20 ± 5℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए।इसे तुरंत -20℃ थर्मोस्टेटिक रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जाना चाहिए।यदि इसे उपयुक्त स्थिति में संग्रहीत किया जाए तो वैधता अवधि 2 वर्ष है।
